☆ 制备转染载体:选择适当的转染载体,如脂质体、病毒等,将目的基因包裹在转染载体中(这个步骤是载体构建,将目的基因插入到转染载体中,形成重组目的基因片段,并利用这种重组片段转染目标细胞,从而将目的基因导入细胞中) ☆ 进行转染:按照生产...
关于细胞转染，Lipo3000是一种常用的转染试剂。在实验前，你需要准备好Lipo3000转染试剂（Thermo）和Opti-MEM（或无血清的培养基）。接下来，你可以按照实验步骤进行操作。在进行Lipofectamine™ 3000转染时，需确保操作环境清洁，以避免污染。操作过程中，要佩戴适当的防护装备，如手套和护目镜，以确保安全。◇ 转染...
5向细胞中加入 50 μL 步骤4所得复合物; 轻轻涡旋平板,确保复合物均匀分布至整个孔中 质粒转染效率分析 在转染 GFP 报告基因构建体后 48 h,通过显微镜和流式细胞仪评价细胞。为了评估转染效率,首先通过荧光显微镜观察细胞,以定性评估蛋白表达、形态和活力(图1)。然后,通过吸出培养基并替换为 250 μL ...
一、实验步骤 1、提前一天准备细胞 在进行转染前一天,首先对293T细胞进行胰酶消化处理,并将其培养于10厘米培养皿中,以确保细胞能够充分贴壁且密度达70%-80%。随后,将细胞置于37摄氏度、含有5% CO2的培养箱中孵育8至24小时,待细胞完全贴壁后即可开始进行转染操作。 2、转染 1)转染前,需换液,使用10毫升完全培养...
脂质体转染操作步骤 进行实验之前,请先规划好实验,一般细胞转染需要24h-72h,所以要充分了解细胞生长速度,计算所需脂质体和DNA的储备量,并确认准备好所需试剂:Opti-MEM无血清培养基,Lipofectamine转染试剂,以及DNA,这个一定要确认好。 1、细胞铺板 (1)一般会选择复苏细胞传代3-4次(...
1. 清洗电转杯,将电转杯置于75%酒精中浸泡2小时,然后在紫外灯下照射后即可使用。 2. 电穿孔前一天,以合适密度传代细胞,使细胞在转染前出于对数生长期。对于原代培养细胞,一般培养2-3天后,细胞单层融合度可以达到70-80%,即可开始试验。 3. PBS洗细胞2次,胰酶消化细胞2min,细胞变圆后,用10%血清培养基终止消化...
对于每个转染样品（以六孔板为例），按如下方步骤制备转染复合物:1) Lipo2000稀释液：取合适的EP管加入1500μl（250μl/孔） Opti-MEM，加入60μl（10μl/孔）Lipo2000混匀，室温下静置5分钟。2) DNA稀释液：根据DNA的种类不同，分别于EP管中加入250μl/孔Opti-MEM，再加入4μg/孔质粒DNA轻轻混匀。3)...
下面以最常用的脂质体介导的贴壁细胞转染为例，介绍其操作步骤：转染前准备 ①细胞培养 选择处于对数生长期、生长状态良好的贴壁细胞，提前 1 - 2 天接种到培养板中，使转染时细胞汇合度达到 70% - 90%。细胞培养使用含血清、抗生素的完全培养基，置于 37℃、5% CO₂培养箱中培养。②试剂准备 质粒 DNA：确保...
稳转：外源DNA整合到细胞基因组中或作为附加体质粒保留在细胞中。与瞬时转染不同，稳定转染允许外源DNA在...
实验步骤：将DNA，RNA，siRNA或寡核苷酸和转染试剂分别在不同的管中稀释→将两者混合形成混合物→将形成的混合物加入细胞中，脂质体的正电荷有助于帮助复合物粘附到细胞膜上→复合物经细胞内吞作用进入细胞→检测基因表达或沉默情况。电穿孔法：利用电脉冲可逆地击穿细胞膜形成瞬时的膜上小孔，同时细胞膜上电势升高，...