其次,稳定转染和瞬时转染对外源基因的要求也不同。稳定转染通常需要使用具有复制能力的质粒或病毒载体,以便外源基因可以在细胞内稳定存在并整合到细胞基因组中。而瞬时转染则不需要使用具有复制能力的载体,因为外源基因只是短暂地表达,拷贝数会被稀释,无法达到持续表达外源基因的目的。根据转染试剂的不同,可分为:化...
转染——是将外源基因如DNA、RNA导入真核细胞的技术。是真核细胞在一定条件下主动或被动导入外源基因而获得新的表型的过程。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、基因表达调控、突变分析和蛋白质生产等领域中,转染技术的应用越来越广泛。转染...
其实很简单,如果是普通易转染细胞,就选择化学介导法;如果细胞是一些很难转染的细胞,如原代细胞、神经细胞等,在化学转染方法效果不好的情况下,可优先考虑电转染;如果电转效果也不好,或者说想要做体内转染,就可考虑包装病毒,构建稳转株。 无论采用哪种转染技术,要想获得最优的转染效果,都需要对转染条件进行不断的优...
细胞转染(Transfection)是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,是目前研究基因功能、基因编辑、调控基因表达、生产重组蛋白等实验最常用的方法。如何高效、低毒、快速完成细胞转染是众多科研工作者关心的问题。 尽管很多读者都曾经或者经常做细胞转染实验,但面对原代...
化学转染:通过使用一些化学物质,如聚乙烯亚胺(PEI)、脂质体等,来改变细胞膜的物理和化学性质,使其对外源性DNA或RNA具有亲和力,从而实现基因转移。2. 化学转染的方法 目前,将外源DNA 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类,即生物方法和物理化学方法。生物方法主要以病毒作为载体,通过病毒感染的方式将外源 ...
1. 电转法原理电穿孔法,又叫电转法,利用电脉冲在细胞膜上形成暂时的孔,使核酸物质能穿过孔进入细胞。首先,使用带电荷的转染试剂将目的基因或者质粒包裹起来,形成转染复合物;然后,细胞在仪器的高场强电脉冲处理之后,会在一侧形成电压差异,从而使得目的基因以类似电泳的方式进入到细胞内。图2:电转法原理图...
转染的注意事项 01 有血清时的转染 血清一度曾被认为会降低转染效率,但只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清,在转染过程中是可以使用血清的。 转染过程在两步中需要使用培养基做为稀释液:在DNA-阳离子脂质体复合物准备过程以及复合物同细胞接触过程。
细胞转染是指将外源物质引入到目标细胞内的过程。转染试剂起到载体的角色,帮助外源物质穿过细胞膜,并使其保持在细胞内。细胞转染的基本原理有三种:离子类转染试剂:如钙磷法,通过与DNA形成复合物进入细胞,或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行电击转染。载体类转染试剂:如聚乙烯醇、聚合脂质体等,通过与DNA、RNA或蛋白质...
原理:对于用脂质体不能实现转染的细胞,可以采用病毒转染。腺病毒,逆转录病毒和慢病毒载体已广泛用于哺乳动物细胞体内外的基因转染。 实验步骤:通过基因克隆方法获得重组病毒表达载体→转染包装细胞系,扩增并分离得到重组病毒颗粒→纯化并滴定病毒液→转导目的细胞(含有病毒特异性的受体)→从培养基中移除病毒→检测基因表达...