转染效率一般易受细胞类型、核酸性质和方法选择三重影响。 2 细胞转染的三大方法 分类 原理 特点 化学转染 脂质体 / 阳离子聚合物包裹核酸,通过膜融合递送 ✔ 操作简便,成本低✖对部分难转染细胞效率低 物理转染 电穿孔 / 显微注射等机械性穿透细胞膜 ✔ 适用于难转染细胞✖ 需专业设备,参数需优化 病毒转...
成功转染受许多因素的影响,转染方法的选择、细胞系的健康状况和活力、传代次数、汇合度、所用核酸的质量和数量以及培养基中是否含血清都会对您的转染实验结果产生一定的影响。通过优化特定转染条件能够获得高转染效率,但重要的是要注意,无论使用何种转染方法,都会不可避免地会造成一些细...
2. Nucleofector™ 技术操作方法电转法操作的重点在于控制电压和通电时间，如果电压过强，或者脉冲时间太久，都可能会导致细胞死亡；但是，如果减少电压和脉冲时间，又会降低转染效率，尤其是在对原代细胞、干细胞、免疫细胞等难转染的细胞进行转染时，想要同时兼顾转染效率和细胞存活率是非常困难的。为了克服传统电转...
以下是导致转染效率低下的常见原因：1. 细胞状态不佳：转染前，细胞的生长状态和密度会影响转染效率。如果细胞生长不良或处于非对数生长期，转染效率可能会降低。因此，在转染前，应确保细胞处于良好的生长状态，并在适宜的密度下进行转染。2. 转染条件不佳：不同的细胞类型对转染条件有不同的要求。如果使用的转染试...
纯度：高纯度的 RNA 是确保转染效率的基础。RNA 样本中若含有蛋白质、DNA、有机溶剂等杂质，会影响转染试剂与 RNA 的结合以及后续进入细胞的过程。例如，残留的 DNA 可能与 RNA 竞争转染试剂，导致有效转染复合物的形成减少。完整性：完整的 RNA 分子结构对于其在细胞内的稳定性和功能发挥至关重要。降解的 RNA ...
DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如 24 孔板内接种 0.5-2×105个细胞，使用 0.5 µg DNA 和 1-1.5 µL 转染试剂。通过调整 DNA/GMTrans 脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA(μg): GMTrans(μL)比值在 1:0.5-1:5 数据展示 文献引用 Geng X, Tang ...
电转法操作的重点在于控制电压和通电时间,如果电压过强,或者脉冲时间太久,都可能会导致细胞死亡;但是,如果减少电压和脉冲时间,又会降低转染效率,尤其是在对原代细胞、干细胞、免疫细胞等难转染的细胞进行转染时,想要同时兼顾转染效率和细胞存活率是非常困难的。 为了克服传统电转法的这些弊端,近年来科学家们开发出来的...
化学介导——脂质体转染 原理：阳离子脂质体因其正电荷与核酸的磷酸根通过静电作用结合，进而包裹DNA分子，形成DNA脂质复合物。这种复合物能被带负电的细胞膜吸附，并通过细胞内吞进入细胞内。优点：操作简便，转染效率相对较高。缺点：需进行条件优化，某些细胞体系可能难以转染，同时对血清敏感，价格也相对较高。化学...
转染试剂毒性 转染试剂在促进 RNA 进入细胞的过程中,可能对细胞产生一定的毒性作用,影响细胞的正常生理功能和存活状态,进而导致转染效率下降。高毒性的转染试剂会引起细胞凋亡、形态改变、代谢紊乱等不良反应,降低细胞对 RNA 的摄取和处理能力。 评估方法:通过细胞活力检测实验如...
物理转染：物理转染法是基于电流、激光的转染方法。比如：通过电转仪实现转染或者通过光转染的方式，使激光束会在特定的亚细胞位置产生孔洞，来传递外源核酸。决定细胞转染效率的因素有哪些？决定细胞转染效率主要的几个因素：1. 细胞群的生长态势与细胞活力：-在创建细胞分析的过程中，细胞活力往往具有决定性的作用。