转录组测序（RNA-Seq，RNA sequencing）是通过高通量测序技术对生物体内全部转录产物（包括mRNA、非编码RNA等）进行测序的技术。转录组测序能够定量检测基因表达、发现新的转录本、分析基因结构变异和识别基因表达调控网络，是揭示基因功能和调控机制的重要手段。一、转录组测序的概念与原理 转录组是指一个细胞、组织或生...
meRIP-seq是参考Chip-seq发展出来的一种鉴定RNA修饰的方法,目前meRIP-seq已成功应用于m6A和m5C的检测。其原理和步骤为:首先通过polyA捕获mRNA,或者通过rRNA剔除技术去掉rRNA,然后将获得的RNA打成100nt左右的小片段;之后使用修饰特异性的抗体(m6A或m5C抗体)进行免疫共沉淀,含有修饰的RNA片段被富集并回收;进而对回收的RN...
而RNA-seq技术则是近年来兴起的一种高通量测序技术,逐渐替代了传统的microarray技术,成为了研究转录组学的主流方法之一。 二、RNA-seq的原理 1. 测序库构建 在进行RNA-seq实验之前,首先需要构建测序库。通常采用聚合酶链式反应(PCR)或者DNA和RNA的逆转录(Reverse Transcription)来将RNA转录成双链DNA,并添加barcode...
1.测序原理: 三代全长转录组测序:三代测序技术主要包括PacBio SMRT(Single Molecule Real-Time)和Oxford Nanopore等。这些技术通过直接测序RNA分子的全长,不需要进行RNA的反转录和扩增,可以直接获取RNA的全长序列信息。 RNA-seq:RNA-seq是一种第二代测序技术,主要包括Illumina HiSeq和NextSeq等。RNA-seq通过将RNA...
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单细胞原理图 8VASA-seq(高通量单细胞) 单细胞转录组的一种,可以检测全长的序列,主要的方式是打断和加barcode的流程是在细胞内进行的,但是这些实验步骤不能一次完成,分步骤完成意味着每次反应都要通过一次微流控,二每次微流控都会损失细胞,所以最后的得率和双细胞率的数据可能不会很完美。
1 RNA-Seq技术原理 RNA_Seq应用深度测序技术,原理为将总 RNA转化为cDNA片段文库并将测序接头连接到 片段末端,利用高通量方式进行单末端(single-end sequencing )或双末端(pair-end sequencing)测序获 得短序列(reads),依据所使用的测序技术,reads长 度一般在30~400bpo原则上任何高通量测序技术都 可以用于转录组测...
转录组测序（RNA-seq）的建库过程与原理主要包括实验设计和实际操作步骤。首先，根据研究目标选择合适的策略，如真核生物通常使用oligo dT磁珠富集mRNA，而研究lncRNA或原核生物转录组则需去除rRNA。考虑链特异性，有 stranded 和 un-stranded 两种选择。建库步骤详细如下：总RNA提取：检查纯度、浓度和完整性...