作为最常见的转染载体,质粒DNA含有重组基因和调控元件,可以转染到细胞中,用于基因表达调控,研究基因的功能、基因产物的突变分析和生化表征以及基因表达对细胞健康和生命周期的影响。对哺乳动物细胞转染来说,除了合适的载体,转染方法和转染试剂对转染的成功率也起到决定性作用。 1.转染方法体 目前,常用的质粒转染方法可分...
作为最常见的转染载体,质粒DNA含有重组基因和调控元件,可以转染到细胞中,用于基因表达调控,研究基因的功能、基因产物的突变分析和生化表征以及基因表达对细胞健康和生命周期的影响。对哺乳动物细胞转染来说,除了合适的载体,转染方法和转染试剂对转染的成功率也起到决定性作用。 1.转染方法体 目前,常用的质粒转染方法可分...
扩增结束后可按照质粒抽提试剂盒对质粒进行提取。提取的 Parkin 过表达质粒和阴性对照质粒，进行测序(一般可交由公司完成测序)。将测序结果与目的基因序列进行比对分析，后续进行质粒转染。质粒抽提怎么选？质粒提取的目的是去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA 分开，随后去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。按得...
质粒是一种环状的双链DNA分子,通常存在于细菌细胞中,具有自主复制的能力。质粒转染技术利用质粒的特性,将外源基因插入质粒中,然后通过物理或化学手段使质粒进入细胞内,从而实现外源基因的表达。 1. 钙磷法:将质粒DNA与钙盐形成复合物,然后将复合物添加到细胞培养基中,通过细胞摄取复合物实现质粒转染。 2. 电穿孔法...
经典转染技术最初是为了将质粒 DNA 导入细胞而开发,质粒 DNA 目前仍是最常用于转染的载体。可将含有重组基因和调控元件的 DNA 质粒转染入细胞,以研究基因功能和调控,进行基因产物的突变分析和生化表征,研究基因表达对细胞健康和生命周期的影响,以及大规模生产蛋白质用于纯化和下游应用。
转染步骤 由于阳离子脂质体转染是实验室最常见、最便捷的转染方法之一,接下来以汉恒生物LipoFiterTM转染试剂为例介绍转染操作。 1.实验分组 无论选择何种转染方法,对照组的设置都至关重要,这能够验证试剂和质粒DNA的质量,也有助于区分特定实验处理的影响与非特异性变化,从而确保实验结果的准确性。通常建议设置以下对照...
2.细胞转染 (1)细胞铺板,以6孔板转染293细胞为例,转染前一天接种0.4×10细胞,培养箱中培养,待细胞密度生长至50-80%时,准备转染。 (2)取一只洁净无菌离心管,将4ug质粒DNA加入到无血清培养基中,用枪轻轻吹打混匀。 (3)取另一只洁净无菌离心管,加入无血清培养基,再加入转染试剂4-10ul,用枪轻轻吹打混匀。
质粒转染能否成功的关键在于质粒转染试剂的选择,目前常用的DNA转染试剂有RFect系列质粒DNA转染试剂、Lipo2000等。选择合适的质粒DNA转染试剂,一般考虑: 1.对质粒DNA有较高的转染效率。 2.对转染细胞的毒性很小。 3.转染细胞的种类。 目前常见的转染试剂包括RFect、Lipo2000等,主要转染对象为贴壁培养细胞,对悬浮细胞和...