作为最常见的转染载体,质粒DNA含有重组基因和调控元件,可以转染到细胞中,用于基因表达调控,研究基因的功能、基因产物的突变分析和生化表征以及基因表达对细胞健康和生命周期的影响。对哺乳动物细胞转染来说,除了合适的载体,转染方法和转染试剂对转染的成功率也起到决定性作用。 1.转染方法体 目前,常用的质粒转染方法可分...
扩增结束后可按照质粒抽提试剂盒对质粒进行提取。提取的 Parkin 过表达质粒和阴性对照质粒，进行测序(一般可交由公司完成测序)。将测序结果与目的基因序列进行比对分析，后续进行质粒转染。质粒抽提怎么选？质粒提取的目的是去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA 分开，随后去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。按得...
作为最常见的转染载体,质粒DNA含有重组基因和调控元件,可以转染到细胞中,用于基因表达调控,研究基因的功能、基因产物的突变分析和生化表征以及基因表达对细胞健康和生命周期的影响。对哺乳动物细胞转染来说,除了合适的载体,转染方法和转染试剂对转染的成功率也起到决定性作用。 1.转染方法体 目前,常用的质粒转染方法可分...
通过质粒转染,可以实现基因表达、基因敲除、基因敲入等多种目的。在分子生物学和遗传学研究中,质粒转染是一项必不可少的技术。 2. 在质粒转染实验中,常用的质粒类型包括原核质粒和真核质粒。原核质粒一般来自细菌或古细菌,包含有来自原核生物的复制起始点和选择标记基因。真核质粒则多来自真核生物,例如哺乳动物、酵母...
质粒是一种环状的双链DNA分子,通常存在于细菌细胞中,具有自主复制的能力。质粒转染技术利用质粒的特性,将外源基因插入质粒中,然后通过物理或化学手段使质粒进入细胞内,从而实现外源基因的表达。 1. 钙磷法:将质粒DNA与钙盐形成复合物,然后将复合物添加到细胞培养基中,通过细胞摄取复合物实现质粒转染。 2. 电穿孔法...
图1.DNA 转染与 mRNA 转染之间的差异。与转染的 mRNA 不同,转染的 DNA 必须在表达前进入胞核。 用质粒转染细胞的指南和考虑事项 载体构建体的拓扑结构 (线形或超螺旋形) 和大小、质粒 DNA 的质量和启动子选择是影响质粒转染效率的主导因素。 更多了解质粒 DNA 转染优化 ...
经典转染技术最初是为了将质粒 DNA 导入细胞而开发,质粒 DNA 目前仍是最常用于转染的载体。可将含有重组基因和调控元件的 DNA 质粒转染入细胞,以研究基因功能和调控,进行基因产物的突变分析和生化表征,研究基因表达对细胞健康和生命周期的影响,以及大规模生产蛋白质用于纯化和下游应用。
转染后 SH-SY5Y 细胞内ParkinmRNA 表达情况:RT-PCR 结果显示,Parkin过表达质粒转染后,正常对照组与阴性对照组的 Parkin-mRNA 水平没有明显差异 (P>0.05);而与正常对照组和阴性对照组相比,Parkin对照组的 mRNA 表达量有明显提高 (P<0.01)。另外,RT-PCR 的溶解曲线 (Melt Curve) 分析结果显示,扩增产物的特异性...