以下是质粒转染实验的一般步骤：一、准备细胞和质粒1. 准备适合的细胞系，处于对数生长期，并进行细胞传代培养。2. 准备好要转染的质粒，通常为DNA片段，进行浓度测定和质量检测。二、质粒转染试剂选择根据细胞类型和实验目的选择适当的转染试剂。常见的转染试剂有脂质体、阳离子聚合物和病毒载体等。三、细胞处理 1. ...
2、转染液配置，每孔细胞用量如下：A. 用50ul无血清培养基稀释质粒DNA，轻轻混匀。B. 取适量合适的质粒转染试剂在50ul无血清培养基中稀释，室温孵育5min。C. 将前两步所稀释的DNA和质粒转染试剂混合，轻轻混匀，室温放置30min。3、在每孔细胞中加入混合后的转染液，轻轻摇匀。4、贴壁细胞可在转染4-6h后更换完...
立即续费VIP 会员中心 VIP福利社 VIP免费专区 VIP专属特权 客户端 登录 百度文库 其他 质粒共转染细胞步骤质粒共转染细胞步骤如下: 准备细胞→准备质粒→选择转染试剂→细胞处理→质粒转染→筛选与分析。©2022 Baidu |由 百度智能云 提供计算服务 | 使用百度前必读 | 文库协议 | 网站地图 | 百度营销 ...
质粒转染细胞实验操作步骤 1.1转化细胞细胞铺板:将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。 1.2 转染:16h后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA,每个样品设置6个复孔 (1)配制DNA和转染试剂: 96孔板转染质粒时每孔比例为pLenti:Firefly:Renilla:转染试剂=0.2μg:0.1μg:0.01μg:0.25μL (2)稀释好DNA及转染试剂,常温孵育5...
(2) 配制转染试剂 ① 125 μL OPTI-MEN +10 μL P3000 reagent+2.5 μg质粒, 混匀 ② 125 μL OPTI-MEN + 5 μL Lipofectamine 3000,混匀 ③ 分别将①和②混匀,室温放置15min。 (3)转染 将六孔板中的细胞更换新的培养基,加入③中转染试剂,混匀,37℃,5%CO2培养箱中感染5h。
步骤:2.5ug质粒DNA + 200ul opti-MEM + 6ul转染液混匀室温静置15min待转染cell换优化培养基opti-MEM 1.3ml,切记要轻轻加培养基,勿冲起cell把transfection complex(200ul)轻轻均匀滴入cell培养基中,十字形摇晃plate,混匀37℃,CO2培养箱培养2.转化:外源DNA(质粒作为载体)导入受体细胞(大肠杆菌感受态cell)步骤:...
(1)取细胞状态良好,活力98%以上,对数生长期细胞铺六孔板,90万/孔; (2) 27°静置培养30 min,待完全贴壁后进行转染; (3)转染体系 注:先将质粒加入到转染缓冲液里,再加转染试剂 (4) 室温孵育30-45 min; (5) 孵育好之后滴加到预先铺好的六孔板中; ...
质粒的提取准备质粒提取盒和扩增的带质粒大肠杆菌培养液(1)取75ml扩增变浑浊的LB液体培养基置于试管中。(2)5,000×g离心10分钟,弃去上清液,将试管倒置在滤纸上空干。(3)取出质粒提取盒,用3ml细胞重悬浮液对试管中的细胞进行重悬浮。(4)加入3ml细胞裂解液,轻轻摇晃试管混匀,室温下孵育3分钟,产生白色絮状沉淀,...
质粒转染过程可以简单地分为以下几个步骤:首先是质粒的设计与构建,其次是质粒的引入,最后是质粒在细胞中的表达与筛选。在这几个步骤中,质粒的设计与构建尤为关键。质粒通常需要根据实验需求进行定制,以确保能够在特定的宿主细胞中高效表达目的基因。这一步骤的成功与否,直接影响到后续实验的成败。
《细胞实验》17 质粒转染实验步骤 质粒转染大肠杆菌 材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒 仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml 离心管，消毒枪头，无菌操作台 实验步骤：1.LB培养基的配制：在...