以下是质粒转染实验的一般步骤：一、准备细胞和质粒1. 准备适合的细胞系，处于对数生长期，并进行细胞传代培养。2. 准备好要转染的质粒，通常为DNA片段，进行浓度测定和质量检测。二、质粒转染试剂选择根据细胞类型和实验目的选择适当的转染试剂。常见的转染试剂有脂质体、阳离子聚合物和病毒载体等。三、细胞处理 1. ...
B. 取适量合适的质粒转染试剂在50ul无血清培养基中稀释，室温孵育5min。C. 将前两步所稀释的DNA和质粒转染试剂混合，轻轻混匀，室温放置30min。3、在每孔细胞中加入混合后的转染液，轻轻摇匀。4、贴壁细胞可在转染4-6h后更换完全培养基，悬浮细胞可在转染后18-48h间进行细胞换液，转染18-48h后可检测基因mRNA...
将六孔板中的细胞更换新的培养基,加入③中转染试剂,混匀,37℃,5%CO2培养箱中感染5h。 实验中遇到的小问题及解决办法: 1. 出于省钱,在转染5h后我将含有转染试剂的培养基加入六孔板中另外一孔的细胞中,继续感染5h,在荧光下检测发现感染效率是一样的。(啊贫穷的课题组和时刻想着省钱的我) 2. 质粒转染的效率...
具体步骤如下:首先将12ul的质粒DNA加入50ul感受态cell中,轻柔混合后进行冰浴30min。接着向管中加入培养基,混匀后使细菌恢复正常生长状态。然后在42℃下热激90s,迅速冰浴2min,最后在37℃下震荡培养(﹤225rpm)1h,使细菌获得新的遗传特性。 转染(n)是将含有目的基因的载体转移到真核细胞内的过程。在进行质粒转染...
1.1转化细胞细胞铺板:将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。 1.2 转染:16h后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA,每个样品设置6个复孔 (1)配制DNA和转染试剂: 96孔板转染质粒时每孔比例为pLenti:Firefly:Renilla:转染试剂=0.2μg:0.1μg:0.01μg:0.25μL
1、昆虫细胞扩P1转染: (1)取细胞状态良好,活力98%以上,对数生长期细胞铺六孔板,90万/孔; (2) 27°静置培养30 min,待完全贴壁后进行转染; (3)转染体系 注:先将质粒加入到转染缓冲液里,再加转染试剂 (4) 室温孵育30-45 min; (5) 孵育好之后滴加到预先铺好的六孔板中; ...
质粒转染过程可以简单地分为以下几个步骤:首先是质粒的设计与构建,其次是质粒的引入,最后是质粒在细胞中的表达与筛选。在这几个步骤中,质粒的设计与构建尤为关键。质粒通常需要根据实验需求进行定制,以确保能够在特定的宿主细胞中高效表达目的基因。这一步骤的成功与否,直接影响到后续实验的成败。
《细胞实验》17 质粒转染实验步骤 质粒转染大肠杆菌 材料试剂：胰化蛋白胨，酵母提取物，琼脂，NaCl，NaOH（调pH），氨苄青霉素，卡那霉素，质粒提取试剂盒 仪器：高压灭菌锅，42℃恒温水浴锅，，恒温摇床（37℃,225rpm），无菌培养板，消毒1.5ml 离心管，消毒枪头，无菌操作台 实验步骤：1.LB培养基的配制：在...
1)按照 0.3～0.5 x 106/mL 的密度将 ExpiCHO-S 细胞接种到 EmCD CHO-S 203 培养基 + 6 mM 谷氨酰胺,当细胞密度达到 2.5～3.5 x 106/mL 时进行转染。(转染时细胞密度很关键,接种第 2 天进行转染) 第2 步:转染试剂准备 1)将质粒...
稳定转染细胞株的制备带质粒的大肠杆菌的激活和扩增(1)取-80?冻存的带有质粒的大肠杆菌在室温解冻,或者放置37?恒温水中约2min,待冰完全融解即可使用。(2)LB培养基的制备按照如下配方配制胰蛋白胨(Tryptone)10g/L酵母提取物(Yeastextract)5g/L氯化钠(NaCl)10g/L用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4,高温高压灭菌...