二、质粒DNA保存 1. 短时间保存可将选择培养基上的菌落保存于℃;长时间保存可将菌液-70℃保存于甘油或DMSO溶液中。 2. 从保存在选择平板上挑取菌落进行培养,并通过限制酶分析检测质粒。 3. 溶于TE缓冲液的质粒DNA可在4℃短时间保存,并可于-20℃或-70℃长时间保存。Protocol...
实验方法原理 当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。推荐采用本方案从1-24个菌落培养液中制备少量的质粒DNA,尽管该方案十分快捷,但制备的DNA的质量要比碱裂解法差。 实验...
AxyPrep 质粒小量制备试剂盒采用快速、高效的方法,通过小量制备管的形式纯化质粒DNA。每管适合从多至4 ml LB细菌培养物或2 ml肉汤培养物中提取质粒DNA。整个过程不超过20 min,纯化后的质粒DNA可直接适用于测序、限制性酶切、体外转录与翻译、构建分子文库、细菌转化等。
从细菌分离质粒DNA的方法都包含3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细胞;分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸纳(SDS)可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS处理后,细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上,同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多,易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的...
当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状,离心时可沉淀下来。碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。 1. 接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中,在37°C培养至饱和状态(过夜)。 2. 取...
How To Perform a Plasmid Miniprep from YouTube, 视频播放量 430、弹幕量 0、点赞数 3、投硬币枚数 1、收藏人数 11、转发人数 2, 视频作者 无非一梦, 作者简介 下辈子不学医.,相关视频:DNA提取和设置PCR反应(实验操作),Plasmid Isolation质粒的分离制备,质粒DNA重组
而且在提取进程中,无需酚-氯仿抽提、无需酒精沉淀,可在较短时刻内完成质粒的提取和纯化。 四 1.细菌培育及菌体的收成。 2.用试剂盒进行小量质粒制备。 五 1.将菌株接种到液体LB培育基中,加入氨苄青霉素至100g/ml,150rpm振荡16h; 2.吸取培育菌液与离心管中,13000rpm室温下离心2min。倒掉上清,然后倒置于...
本文介绍了强碱法小量制备质粒DNA的原理及操作流程。有助于了解基因工程操作中运载基因的载体,掌握最常用的提取质粒DNA的方法。 实验原理 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。利用溶菌酶、强碱(NaOH)及表面活性剂(SDS)使细胞破壁、膜,释放出胞内染色体DNA,质粒DNA及其它物质,通过一...
电泳检测纯化的质粒载体(1 % Agarose)。80V 2uL质粒DNA + 1uL 10xloading + 0.5uL SYBR + 2 uL无菌水 结果用凝胶成像仪分析照相 可以测OD值 核酸带负电,向正极泳动。 质粒DNA的提取及电泳分析 【实验目的】 1.掌握碱裂解法小量提取质粒DNA的原理和方法。 2.掌握琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA方法。 3.熟悉质...
质粒DNA的小量制备用于抽提微克级的质粒DNA,主要有碱裂解法、96孔微量滴定板碱裂解法、煮沸小量制备法。实验方法原理当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不