质粒提取试剂盒 四、实验步骤: 1. 挑起白色单菌落,于含有相应抗生素的LB液体培养基中培养8-12h。 2. 取1ml菌液保存,其余菌液用于提取质粒DNA。 3. 取1.5-4.5ml过夜培养菌液,9,000rpm离心30sec,尽可能的倒干上清,收集菌体。 4. 用250μl溶液P1重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。 5. 加250μl的溶液P2...
简单介绍质粒DNA提取实验操作步骤 1.细菌繁殖：LB培养基，2ml / 20ml，37℃，200rpm，摇动过夜；2.离心10分钟，转速为5000 rpm，4°C；丢弃液体；3.用预冷的TES缓冲液洗涤沉淀物（细胞），在4°C下以10 rpm，5 000 rpm离心10分钟，加入预冷的1 ml溶液I，并冰浴10分钟；4.重悬，加入150ul溶菌酶母液，在...
2、质粒提取 (1)菌液12000rcf离心5min,弃掉上清,加入0.2ml溶液I(已加入RNase),充分混匀后,加入0.25ml溶液II,颠倒混匀,室温放置5min,加入0.4ml 溶液III,颠倒混匀后,13000rcf 离心30min。 (2)上清转入新的1.5mlEP管中,加入等体积的酚氯仿混合液,充分混匀。10000rcf 离心10min。 (3)取上清,转入新的EP管,...
质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯 仿裂解法。跟据不同的实验目的和仪器设备择取不同的实验方案。 实验流程 一、实验方法及原理:(碱裂解法) 碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质...
1)将之前提取好的质粒放入1.5ml离心管中,加入1/10体积的3mol/L 无菌乙酸钠溶液。 2)加入2倍体积的无水乙醇,放置于-20℃沉淀4-6h或过夜。 3)4℃,高速离心机14000rpm,离心20min. 4)弃去上清,70%乙醇洗2次。 5)空气干燥,可置超净工作台干燥。
提取质粒基本包括三大步骤 1.细菌的培养和质粒的扩增 2.细菌菌体的裂解 3.质粒DNA的纯化 实验步骤 本实验室主要采用的诺唯赞的大提试剂盒,基本原理是碱裂解法 01 质粒提取 1. 600ml的菌液,升速9,降速9,转速G0 4696,10min 温度 20或者25℃,收4管50ml的菌沉淀 ...
一、实验目的 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤。 二、实验原理 从细菌中分离质粒DNA 的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细胞:分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100 可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS 或Triton X-100 处理后,...
(1)实验原理 释放(2)方式步骤 ①在超净工作台上(或在酒精灯旁),取1 mL含质粒的大肠杆菌菌液,___于100 mL LB培育基中,于37 ℃摇床振荡培育8～10 h,如无摇床可每 h用手摇晃一次。 ②取 mL菌液于 mL EP管中,以10 000 rpm离心 min,弃___。 ③加 mL_...
DNA在pH5～9的溶液中是稳定的，但当pH＞12或pH＜3时，就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L，加入溶液Ⅱ后，该系统的pH为12.0～12.6，因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。SDS是一种阴离子去垢剂，它的主要作用有：①溶解细胞膜上的脂肪与蛋白，因而溶解膜...