1. RNase A溶液 2. 溶液P1、P2和P3 3. 漂洗液 4. 洗脱液 5. 吸附柱 6. 收集管 质粒提取试剂盒 四、实验步骤: 1. 挑起白色单菌落,于含有相应抗生素的LB液体培养基中培养8-12h。 2. 取1ml菌液保存,其余菌液用于提取质粒DNA。 3. 取1.5-4.5ml过夜培养菌液,9,000rpm离心30sec,尽可能的倒干上清,收...
实验:大肠杆菌质粒DNA的提取(1)实验原理释放(2)方式步骤①在超净工作台上(或在酒精灯旁),取1 mL含质粒的大肠杆菌菌液,___于100 mL LB培育基中,
简单介绍质粒DNA提取实验操作步骤 1.细菌繁殖：LB培养基，2ml / 20ml，37℃，200rpm，摇动过夜；2.离心10分钟，转速为5000 rpm，4°C；丢弃液体；3.用预冷的TES缓冲液洗涤沉淀物（细胞），在4°C下以10 rpm，5 000 rpm离心10分钟，加入预冷的1 ml溶液I，并冰浴10分钟；4.重悬，加入150ul溶菌酶母液，在...
1)将之前提取好的质粒放入1.5ml离心管中,加入1/10体积的3mol/L 无菌乙酸钠溶液。 2)加入2倍体积的无水乙醇,放置于-20℃沉淀4-6h或过夜。 3)4℃,高速离心机14000rpm,离心20min. 4)弃去上清,70%乙醇洗2次。 5)空气干燥,可置超净工作台干燥。 6)加200ul无菌水溶液干燥后所得沉淀,即为质粒溶液。 7)紫...
一、实验目的 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤。 二、实验原理 从细菌中分离质粒DNA 的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细胞:分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100 可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS 或Triton X-100 处理后,...
以下是具体的实验原理和操作步骤。 实验原理: 碱裂解法利用碱性溶液将细菌细胞的细胞壁和细胞膜溶解,使细菌细胞内的质粒DNA被释放出来。接着,使用中性化剂中和碱性溶液,使DNA带正电荷,而细胞中的蛋白质则带负电荷,从而能够通过离心将DNA与蛋白质分离。最后,通过浓缩、洗涤和纯化,得到高质量的质粒DNA。 操作步骤: ...
溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L，加入溶液Ⅱ后，该系统的pH为12.0～12.6，因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。SDS是一种阴离子去垢剂，它的主要作用有：①溶解细胞膜上的脂肪与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜；②解聚细胞中的核蛋白，使蛋白质与DNA分开；③SDS能与蛋白质结合成为SDS-蛋白质...
质粒DNA提取可以:(1)快速纯化质粒;(2)用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。实验方法原理质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。
质粒DNA的提取的几个关键步骤:溶液II加入对细菌的裂解要完全,呈鼻涕状拉丝.溶液III加入后离心蛋白要去除干净,为了避免蛋白污染,可以吸取上清时少吸一点,宁愿损失一些DNA.RNA酶消化要彻底,不然影响电泳.电泳检测实验... 分析总结。 溶液iii加入后离心蛋白要去除干净为了避免蛋白污染可以吸取上清时少吸一点宁愿损失一些dna...