2、质粒提取 (1)菌液12000rcf离心5min,弃掉上清,加入0.2ml溶液I(已加入RNase),充分混匀后,加入0.25ml溶液II,颠倒混匀,室温放置5min,加入0.4ml 溶液III,颠倒混匀后,13000rcf 离心30min。 (2)上清转入新的1.5mlEP管中,加入等体积的酚氯仿混合液,充分混匀。10000rcf 离心10min。 (3)取上清,转入新的EP管,...
质粒提取试剂盒 四、实验步骤: 1. 挑起白色单菌落,于含有相应抗生素的LB液体培养基中培养8-12h。 2. 取1ml菌液保存,其余菌液用于提取质粒DNA。 3. 取1.5-4.5ml过夜培养菌液,9,000rpm离心30sec,尽可能的倒干上清,收集菌体。 4. 用250μl溶液P1重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。 5. 加250μl的溶液P2...
(1)实验原理 释放(2)方法步骤 ①在超净工作台上(或在酒精灯旁),取1 mL含质粒的大肠杆菌菌液,___于100 mL LB培养基中,于37℃摇床振荡培养8～10 h,如无摇床可每0.5 h用手摇晃一次。 ②取1.4 mL菌液于1.5 mL EP管中,以10 000 rpm离心0.5 min,弃___。 ③加0.1 ...
(1)实验原理 释放 (2)方法步骤 ①在超净工作台上(或在酒精灯旁),取1 含质粒的大肠杆菌菌液,___于100 培养基中,于37 ℃摇床振荡培养8～10 h,如无摇床可每0.5 h用手摇晃一次。 ②取1.4 菌液于1.5 管中,以10 000 离心0.5 ,弃___。 ③加0.1_...
简单介绍质粒DNA提取实验操作步骤 1.细菌繁殖：LB培养基，2ml / 20ml，37℃，200rpm，摇动过夜；2.离心10分钟，转速为5000 rpm，4°C；丢弃液体；3.用预冷的TES缓冲液洗涤沉淀物（细胞），在4°C下以10 rpm，5 000 rpm离心10分钟，加入预冷的1 ml溶液I，并冰浴10分钟；4.重悬，加入150ul溶菌酶母液，在...
实验步骤 本实验室主要采用的诺唯赞的大提试剂盒,基本原理是碱裂解法 01 质粒提取 1. 600ml的菌液,升速9,降速9,转速G0 4696,10min 温度 20或者25℃,收4管50ml的菌沉淀 2. 每管菌沉淀中加入RSE12ml (注意检查是否加入RNAase,放入4℃储存),用枪头将菌液戳下,再反复吸取,使菌液混合均匀为乳状黄色(目的...
(1)、快速纯化质粒 (2)、用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验 基本步骤 (1)细菌的培养和质粒的扩增 (2)细菌菌体的裂解 (3)质粒DNA的纯化 一、摇菌培养 1、取经过正确鉴定的克隆菌液,在LB固体平板上进行涂布(该平板含有质粒扩增所需的培养基)。
一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤:①培养细菌,使质粒DNA大量扩增;②收集和裂解细菌;③分离和纯化质粒DNA。分离制备质粒DNA的方法很多,其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法、羟基磷灰石层析法等。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。本实验介绍碱裂...
一、实验目的 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤。 二、实验原理 从细菌中分离质粒DNA 的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细胞:分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100 可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS 或Triton X-100 处理后,...