1)将之前提取好的质粒放入1.5ml离心管中,加入1/10体积的3mol/L 无菌乙酸钠溶液。 2)加入2倍体积的无水乙醇,放置于-20℃沉淀4-6h或过夜。 3)4℃,高速离心机14000rpm,离心20min. 4)弃去上清,70%乙醇洗2次。 5)空气干燥,可置超净工作台干燥。 6)加200ul无菌水溶液干燥后所得沉淀,即为质粒溶液。 7)紫...
实验:大肠杆菌质粒DNA的提取(1)实验原理释放(2)方法步骤①在超净工作台上(或在酒精灯旁),取1 mL含质粒的大肠杆菌菌液,___于100 mL LB培养基中,
质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯 仿裂解法。跟据不同的实验目的和仪器设备择取不同的实验方案。 实验流程 一、实验方法及原理:(碱裂解法) 碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质...
该步骤可以不做。 9. 向上清加入2倍体积乙醇700μL,混匀后,室温放置15-30min。10000r/min离心10 min。倒去上清液,把离心管倒扣在吸水纸上,吸干液体。 10. 用500 μL 70% 乙醇轻轻洗涤质粒DNA沉淀,离心10000r/min离心5min弃上清,干燥。 11. 加入适量(20-50 μL)的无菌水,室温使DNA完全溶解,-20℃保存...
实验原理 现在较常用的质粒提取方法有三种:碱裂解法、煮沸法和去污剂裂解法,前两种方法较为剧烈,适用于较小的质粒(<15Kb),而去污剂裂解法则比较温合,一般用于分子量较大的质粒(>15Kb)。 碱裂解法是一种最广泛使用的制备质粒DNA的方法。其原理为:染色体DNA远大于质粒DNA,且染色体DNA为线状分子,而质粒为共价闭合...
简单介绍质粒DNA提取实验操作步骤 1.细菌繁殖：LB培养基，2ml / 20ml，37℃，200rpm，摇动过夜；2.离心10分钟，转速为5000 rpm，4°C；丢弃液体；3.用预冷的TES缓冲液洗涤沉淀物（细胞），在4°C下以10 rpm，5 000 rpm离心10分钟，加入预冷的1 ml溶液I，并冰浴10分钟；4.重悬，加入150ul溶菌酶母液，在...
(1)实验原理 释放 (2)方法步骤 ①在超净工作台上(或在酒精灯旁),取1 含质粒的大肠杆菌菌液,___于100 培养基中,于37 ℃摇床振荡培养8～10 h,如无摇床可每0.5 h用手摇晃一次。 ②取1.4 菌液于1.5 管中,以10 000 离心0.5 ,弃___。 ③加0.1_...
步骤5～7 可以选择负压法或离心法纯化质粒DNA。 A. 负压法 5A. 将质粒DNA 制备管插到负压装置的接口上。吸取步骤4 中的离心上清并转移到制备管中,开启并调节负压至-20-30 英寸汞柱,缓慢吸走管中溶液。 6A. 加500 μl Buffer W1,吸尽管中溶液。 7A. 加700 μl Buffer W2,吸尽管中溶液;以同样的方法再...
质粒DNA的提取实验步骤如下: 质粒DNA的提取设备 一、实验目的: 去除基因组DNA、蛋白质等高分子物质,去除其他细菌成分,获得高品质的质粒DNA,可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR等实验。 二、实验原理: 采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再...