2)用质粒小量抽提试剂盒,按说明书要求提取质粒。 3)细菌高速离心1min,彻底去除上清。 4)加入250ulRB溶液,振荡器充分悬浮细菌。 5)加入250ulLB溶液。立即上下颠倒10次,使细菌裂解,室温,放置2min。 6)加入250ulNB溶液。立即上下颠倒10次,使之充分中和,室温,放置2min。 7)室温,1500rpm,高速离心15min。 8)将吸...
1. RNase A溶液 2. 溶液P1、P2和P3 3. 漂洗液 4. 洗脱液 5. 吸附柱 6. 收集管 质粒提取试剂盒 四、实验步骤: 1. 挑起白色单菌落,于含有相应抗生素的LB液体培养基中培养8-12h。 2. 取1ml菌液保存,其余菌液用于提取质粒DNA。 3. 取1.5-4.5ml过夜培养菌液,9,000rpm离心30sec,尽可能的倒干上清,收...
简单介绍质粒DNA提取实验操作步骤 1.细菌繁殖：LB培养基，2ml / 20ml，37℃，200rpm，摇动过夜；2.离心10分钟，转速为5000 rpm，4°C；丢弃液体；3.用预冷的TES缓冲液洗涤沉淀物（细胞），在4°C下以10 rpm，5 000 rpm离心10分钟，加入预冷的1 ml溶液I，并冰浴10分钟；4.重悬，加入150ul溶菌酶母液，在...
质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯 仿裂解法。跟据不同的实验目的和仪器设备择取不同的实验方案。 实验流程 一、实验方法及原理:(碱裂解法) 碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性,再将pH值调至中性使其复性,复性的为质粒DNA,而染色体DNA不会复性,缠结成网状物质...
一、实验目的 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤。 二、实验原理 从细菌中分离质粒DNA 的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细胞:分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100 可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS 或Triton X-100 处理后,...
2、质粒提取 (1)菌液12000rcf离心5min,弃掉上清,加入0.2ml溶液I(已加入RNase),充分混匀后,加入0.25ml溶液II,颠倒混匀,室温放置5min,加入0.4ml 溶液III,颠倒混匀后,13000rcf 离心30min。 (2)上清转入新的1.5mlEP管中,加入等体积的酚氯仿混合液,充分混匀。10000rcf 离心10min。
实验:大肠杆菌质粒DNA的提取(1)实验原理释放(2)方式步骤①在超净工作台上(或在酒精灯旁),取1 mL含质粒的大肠杆菌菌液,___于100 mL LB培育基中,
提了这么久质粒或许应该学习一下原理知识啦。在做实验的时候师兄师姐可能只会告诉你实验步骤,告诉你如何操作,很少有师兄师姐会有时间告诉你实验的原理,但是我觉得实验原理是我们必须掌握的呦🌈今天一起学习质粒提取的原理及步骤哦⭐ #科研 #医学生 - 嘉嘉搞科研于20
1.在实验过程中保持操作环境和仪器无菌。 2.碱裂解法中使用的溶液需准备新鲜,并避免受到污染。 3.操作过程中需要低温处理和离心操作,以保护DNA的完整性。 4.质粒DNA的提取可以根据实验目的进行进一步的扩增、测序或转染等应用。 总结: 通过碱裂解法,可以从细菌中提取纯化的质粒DNA。这是一种相对简单、快速而有效的...