不同种属的样本需要不同的内参蛋白。比如,哺乳动物的组织或细胞样本通常选择β-Actin、β-Tubulin、GAPDH等;而植物来源的实验样本,则可以选择Plant Actin、Rubisco等。 定位差异 📍 不同表达部位的蛋白质也需要不同的内参蛋白。这个因素常常被忽略,但在某些特殊条件下,一些内参蛋白的表达并不稳定,会发生变化。 样品...
在蛋白内参的选择中,可以考虑以下几个方面来确定合适的参考蛋白结构: 1.相似性:选择与待测蛋白序列具有高度相似性的蛋白作为参考模板,尤其是在同源蛋白中选择相似性最高的参考结构,可以提高预测结果的准确性。 2.分辨率:在选择参考蛋白结构时,考虑其分辨率的影响。分辨率较高的蛋白结构通常具有较准确的原子坐标信息,能...
3.功能蛋白(functional protein):具有特定生物学功能的蛋白质,如酶、受体、信号转导蛋白等。 三、蛋白内参选择的方法和技巧 选择合适的蛋白内参需要综合考虑以下几个方面: 1.稳定性:选择在实验条件下稳定表达的蛋白质,以保证实验数据的可靠性。 2.特异性:选择与实验目的相关性强的蛋白质,以提高实验的针对性。 3...
内参的选择因素: 1) 样本种属: 2) 目的蛋白的表达定位: 3) 目的蛋白的分子量: 4) 组织特异性: 5) 特殊的实验条件: 生命活动离不开蛋白质,作为生命活动的承担者,蛋白质一直都是主要的研究对象。蛋白免疫印迹(Western Blot)是对目的蛋白进行检测、分析以及定量的一种技术。也是检测蛋白表达的最常用的方法。对于...
怎么选择内参蛋白？内参蛋白主要是一些持家基因，这些持家基因执行大量的基本功能，并持续在多种组织和细胞中高水平表达。 常见内参蛋白包括 Actin、Tubulin、GAPDH、Histone H3 等。但是，研究不同类型的蛋白，对内参的选择是有讲究的，如：1. 胞浆蛋白的内参与胞核蛋白的内参是不一样的；2. 在一定的实验条件下，...
第一要点是选择分子量与靶标蛋白差异较大的内参抗体,以确保两种蛋白在检测过程中不会重叠。一般建议目的蛋白与内参蛋白分子量相差大于 5kDa。 样品类型 根据样品的类型和靶蛋白的细胞定位,选择具有高表达水平的组成型内参抗体。比如,如果样品是细...
通常选择作为内参的蛋白,均可在样本细胞系或组织中稳定表达,且表达量适中(尽量与靶标蛋白在同一线性范围内检测)。选择合适的内参蛋白时,可能还会考虑:内参蛋白分子量、靶标蛋白分子量、亚细胞分布、以及所设计的实验处理类型等。 Cell Signaling Technology(CST)可提供170 多种内参抗...
2目的蛋白分子量 选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如检测目的蛋白分子量为45KD,此时不适宜选择β-actin(42KD)作为内参,可以考虑选择GAPDH(36KD)作为内参。 3目的蛋白表达部位 a、胞浆和全细胞蛋白:β-actin(43KD)、GAPDH(37KD)、Tubulin(55KD)...
在WB实验中,选择合适的内参蛋白至关重要。内参蛋白,即内部参照(Internal Control),是用于校正实验误差和监测实验体系正常运行的关键。对于哺乳动物细胞表达,一般选择由管家基因编码的蛋白作为内参,因为它们在各组织和细胞中的表达相对恒定。🔍 内参的作用 校正蛋白样品定量及上样过程中的误差,确保实验结果的准确性。