在蛋白内参的选择中,可以考虑以下几个方面来确定合适的参考蛋白结构: 1.相似性:选择与待测蛋白序列具有高度相似性的蛋白作为参考模板,尤其是在同源蛋白中选择相似性最高的参考结构,可以提高预测结果的准确性。 2.分辨率:在选择参考蛋白结构时,考虑其分辨率的影响。分辨率较高的蛋白结构通常具有较准确的原子坐标信息,能...
(3)目的蛋白表达部位,全细胞和胞浆蛋白、胞核蛋白、核膜蛋白、线粒体蛋白等都有对应的内参蛋白供选择; (4)实际的实验环境,比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高;在凋亡实验时,Lamin B1等不适合作为内参;在加入抗癌和抗真菌药物时,β-Tubulin的表达易受影响,不适合作为内参;(5)组织特...
(2) 根据蛋白大小选择,一般要选择目的蛋白与内参分子量相差至少5kD以上,才便于对结果分析。且当研究的蛋白的分子量与内参接近时,需要选择分子量与目的蛋白的分子量差距比较大的蛋白。常用内参蛋白的分子量大小见表1。 (3) 根据研究靶蛋白的定位选择内参,比如核蛋白内参可以选择Lamin B、Histone H3等。小编已经将不...
有些人提取蛋白会选择胞浆、胞核分开提取,不提取总蛋白。β-actin在胞浆中表达高效稳定,而总蛋白主要成分就是胞浆蛋白,所以β-actin可以作为总蛋白的内参。理论上细胞核内不表达β-actin,所以不能用于核蛋白内参。同理,细胞核内的蛋白用于做总蛋白内参,自然也不合理,内参自...
选择不受环境因素影响的内参蛋白。比如,GAPDH 是糖酵解中的一个酶,在缺氧和糖尿病等疾病下它的表达会增加,因此 GAPDH 一般不适合用作代谢相关研究的内参蛋白。可以通过取相同量的不同实验条件下的裂解物或样本,进行蛋白质免疫印迹确定。 宿主...
1.考虑目的蛋白分子量,一般需要与目的蛋白分子量相差5kD以上。 2.根据蛋白表达位置选择不同的内参,不同细胞器选择的内参也不同。参考如图 不同细胞器内参选择 3.考虑组织特异性。以下为各种小鼠组织中常见内参的表达水平,供大家参考。 小鼠各组织中常见内参的表达水平 ...
Proteasome (蛋白酶体) PSMC1(49KD) Endosome (内含体) EEA1(170KD) Exosome (外泌体) CD63(26KD),Alix(96KD),CD9(25KD),CD81(26KD) Lipid Raft (脂筏) Flotillin-1(47KD)内参的选择需要考虑实际的试验环境,比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高,不适合做内参。比如在在...
细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是核蛋白,则可能选择Lamin B、Histone H3等作为内参。 实验环境:内参的选择还需要考虑实际的实验环境和样品的前处理。在某些特殊条件下,一些内参蛋白的表达可能会发生变化,从而影响其作...
常用的蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin。一般我们选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上。因此你要知道你检测的蛋白的分子量来选择合适的内参! 不同异构体表达对蛋白的检测是有很大的影响,买抗体前要好好熟悉自己的目的蛋白,很多抗体杂不出条带其实未必是抗体质量的问题。很多...