(2) 根据蛋白大小选择,一般要选择目的蛋白与内参分子量相差至少5kD以上,才便于对结果分析。且当研究的蛋白的分子量与内参接近时,需要选择分子量与目的蛋白的分子量差距比较大的蛋白。常用内参蛋白的分子量大小见表1。 (3) 根据研究靶蛋白的定位选择内参,比如核蛋白内参可以选择Lamin B、Histone H3等。小编已经将不...
答:内参蛋白的选择原则是: 根据样本的种属来源选择。如哺乳动物或者植物等。 考虑目的蛋白的分子量大小。一般情况下,内参蛋白和检测的目的蛋白最好相差在5kDa以上。 根据蛋白表达位置选择不同的内参。不同的细胞器中选择的内参也不同。 内参的选择需要考虑试验处理条件对于内参表达的影响。比如在关于糖代谢的研究(如...
(3)目的蛋白表达部位,全细胞和胞浆蛋白、胞核蛋白、核膜蛋白、线粒体蛋白等都有对应的内参蛋白供选择; (4)实际的实验环境,比如某些细胞中,由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高;在凋亡实验时,Lamin B1等不适合作为内参;在加入抗癌和抗真菌药物时,β-Tubulin的表达易受影响,不适合作为内参;(5)组织特...
有些人提取蛋白会选择胞浆、胞核分开提取,不提取总蛋白。β-actin在胞浆中表达高效稳定,而总蛋白主要成分就是胞浆蛋白,所以β-actin可以作为总蛋白的内参。理论上细胞核内不表达β-actin,所以不能用于核蛋白内参。同理,细胞核内的蛋白用于做总蛋白内参,自然也不合理,内参自...
首先,我们来了解一下WB内参蛋白的选择原则。一般来说,内参蛋白应满足以下条件:具有稳定的表达水平;不受实验条件影响;不易发生变性、降解等变化。因此,在选择内参蛋白时,我们需要关注其在不同条件下(如不同的培养时间、不同的处理因素等)的表达情况,以确保其在整个实验过程中能够保持稳定。
1. 稳定性:内参蛋白在实验过程中的稳定性非常重要。选择一个在长时间内表达稳定的内参蛋白可以帮助我们获得更可靠的结果。 2. 可检测性:内参蛋白需要在实验过程中易于检测和定量。一个难以检测的内参蛋白可能会影响我们的研究结果。 3. 特异性:内参蛋白应该与目的蛋白分离,避免干扰目的蛋白的检测。
第一要点是选择分子量与靶标蛋白差异较大的内参抗体,以确保两种蛋白在检测过程中不会重叠。一般建议目的蛋白与内参蛋白分子量相差大于 5kDa。 样品类型 根据样品的类型和靶蛋白的细胞定位,选择具有高表达水平的组成型内参抗体。比如,如果样品是细胞裂解液,细胞质蛋白可以选择 GAPDH 或 Beta-tubulin,核蛋白可以选择 His...
样本种属来源:不同种属的样本可能需要选择不同的内参蛋白。例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是...
6.确保内参蛋白的表达是恒定的: 内参蛋白应该在不同的条件下或在不同的样品中保持恒定的表达,如果内参蛋白的表达受到某些实验条件的影响,那么它可能不适合作为一个好的内参。 只要你确保了上述各点,那么即使两个目的蛋白被分别展示在两张图中,也是可以使用相同的内参蛋白进行定量分析和标准化的。但为了提供更有说服...