内参的选择还需要考虑实验环境和样品的前处理。在某些特殊条件下,一些内参蛋白的表达也会发生变化,即所谓的“内参不齐”。β-Actin 🏋️♂️ 肌动蛋白(Actin)是细胞的一种重要骨架蛋白,大致可分为六种,其中四种是不同肌肉组织特异性的,其余两种广泛分布于各种组织中,包括β-Actin和γ-non-muscle Actin。
内参蛋白主要是一些持家基因，这些持家基因执行大量的基本功能，并持续在多种组织和细胞中高水平表达。 常见内参蛋白包括 Actin、Tubulin、GAPDH、Histone H3 等。但是，研究不同类型的蛋白，对内参的选择是有讲究的，如：1. 胞浆蛋白的内参与胞核蛋白的内参是不一样的；2. 在一定的实验条件下，内参蛋白的表达发生...
答:内参蛋白的选择原则是: 根据样本的种属来源选择。如哺乳动物或者植物等。 考虑目的蛋白的分子量大小。一般情况下,内参蛋白和检测的目的蛋白最好相差在5kDa以上。 根据蛋白表达位置选择不同的内参。不同的细胞器中选择的内参也不同。 内参的选择需要考虑试验处理条件对于内参表达的影响。比如在关于糖代谢的研究(如...
内参的选择因素: 1) 样本种属: 2) 目的蛋白的表达定位: 3) 目的蛋白的分子量: 4) 组织特异性: 5) 特殊的实验条件: 生命活动离不开蛋白质,作为生命活动的承担者,蛋白质一直都是主要的研究对象。蛋白免疫印迹(Western Blot)是对目的蛋白进行检测、分析以及定量的一种技术。也是检测蛋白表达的最常用的方法。对于...
通常选择作为内参的蛋白,均可在样本细胞系或组织中稳定表达,且表达量适中(尽量与靶标蛋白在同一线性范围内检测)。选择合适的内参蛋白时,可能还会考虑:内参蛋白分子量、靶标蛋白分子量、亚细胞分布、以及所设计的实验处理类型等。 Cell Signaling Technology(CST)可提供170 多种内参抗...
(1) 根据不同的种属,比如哺乳动物通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH;植物来源实验样本,则可以选择Plant actin、Rubisco等。 (2) 根据蛋白大小选择,一般要选择目的蛋白与内参分子量相差至少5kD以上,才便于对结果分析。且当研究的蛋白的分子量与内参接近时,需要选择分子量与目的蛋白的分子量差距比较大的蛋白。常用...
在WB实验中,选择合适的内参蛋白至关重要。内参蛋白,即内部参照(Internal Control),是用于校正实验误差和监测实验体系正常运行的关键。对于哺乳动物细胞表达,一般选择由管家基因编码的蛋白作为内参,因为它们在各组织和细胞中的表达相对恒定。🔍 内参的作用 校正蛋白样品定量及上样过程中的误差,确保实验结果的准确性。
第一要点是选择分子量与靶标蛋白差异较大的内参抗体,以确保两种蛋白在检测过程中不会重叠。一般建议目的蛋白与内参蛋白分子量相差大于 5kDa。 样品类型 根据样品的类型和靶蛋白的细胞定位,选择具有高表达水平的组成型内参抗体。比如,如果样品是细...
分子量差异:为了避免信号干扰和图像解析的复杂性,内参蛋白的分子量应与目的蛋白保持显著差异。一般建议内参蛋白与目的蛋白的分子量相差5kDa以上。 3.目的蛋白表达部位 亚细胞定位:根据目的蛋白在细胞内的定位选择相应的亚细胞器内参。例如,核蛋白检测可选择Lamin A、Lamin B、Histone H3等核内参;膜蛋白检测可选择ATP1A...