对LC-MS数据的进一步研究结果还表明,经过O-糖无糖基化的rhEPO蛋白形态在约8.2min的保留时间处洗脱。此外,这些LC-MS数据还表明rhEPO至少还有两种其它的O-联糖型,以及更多种C端截断的蛋白形态。由此,我们可以看出该工作流程的确可用于快速分析rhEPO的N-联糖基化,帮助我们获取关于占据率和异质性的信息。 结论 最近,...
本发明涉及用于制备包含抗体序列或其片段的多肽的方法,所述多肽具有低 0-联糖基化程度,所述方法包括以下步骤a.提供编码包含抗体序列或其片段的多肽的核酸序列;b.修饰所述核酸序列从而将选自S、T和Y并且受到0-联糖基化的至少一个氨基酸残基取代或缺失;c.将所述经修饰的核酸序列导入合适的宿主细胞,从而使所述经修...
通过对糖链结构的筛选得到转移效率最佳的二糖底物LacNac-Oxa(2C),同时研究发现在LacNac-Oxa的6号位进行改造并不影响Endo-S2的活性,因此对此位置引入叠氮基团或毒素分子,可以实现一酶两步偶联或一酶一步偶联,极大简化糖基化偶联的工艺
应⽤纪要 重组⼈EPO N-联糖基化和O-联糖基化的全⾯ 表征 Matthew A. Lauber, Stephan M. Koza, Erin E. Chambers Waters Corporation 摘要 重组⼈促红细胞⽣成素(rhEPO)分⼦此前由于其糖基化结构相对复杂,⼀直被视为糖基化表征的难题,本应⽤纪要 介绍的两种简易策略可⽤于详细研究rhEPO的...
本研究团队描述了一个用于定制糖结构的连续糖基化反应平台(SUGAR-TARGET),旨在通过一步固定/纯化法生产的固定化酶实现定制、可控的体外 N-连接糖基化。 糖基化是一种重要而复杂的翻译后修饰,它决定了蛋白质的生物和生理特性,如折叠、稳定性、活性和贩运。糖基化被定义为基于蛋白质的疗法的关键质量属性,因为它直...
ADC的糖基化偶联技术不改变抗体的结构,无需进行抗体工程化改造、不引入非天然氨基酸和特定的氨基酸序列突变以便进行酶连,目前拥有糖基化偶联技术的公司也有多家,包括Syniffix,康宁杰瑞和糖岭生物等,但是具体使用的酶和linker接头均有所不同。 Syniffix两酶三步技术 ...
本应用纪要展示了两种可用于详细研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)的N-联糖基化和O-联糖基化的简易策略。在本研究中,我们首先快速释放rhEPO中的N-糖基,对其进行GlycoWorks RapiFluor-MS标记,然后利用灵敏的荧光检测和质谱检测技术进行亲水作用色谱(HILIC)分析。在接下来的平行分析中,我们利用完整蛋白质的HILIC分析甄别...
重组人促红细胞生成素(rhEPO)分子此前由于其糖基化结构相对复杂,一直被视为糖基化表征的难题,本应用纪要介绍的两种简易策略可用于详细研究rhEPO的N-联糖基化和O-联糖基化。充分利用这些工具有助于我们加快新型生物仿制药的开发进程。 优势 解析EPO N-联糖基化和O-联糖基化信息的两种简易...
以几种方法将碳水化合物连接至糖肽,其中N-连接至天冬酰胺和O-连接至丝氨酸和苏氨酸对于重组糖蛋白治疗剂是最相关的。在所有真核细胞的分泌型和细胞表面结合型糖蛋白上均发现O-联糖基化。在通过O-联糖基化产生的结构中具有很大的多样性。通过存在于高尔基体中的数百种酶(糖基转移酶)的催化活性而产生此类聚糖。
(SDS-PAGE)、圆二色谱和光谱等技术分析改性前后鲢鱼PV多级结构的变化;运用高分辨质谱技术对糖基化联合磷酸化修饰的鲢鱼PV进行修饰肽段和位点表征;同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)、嗜碱性粒细胞细胞系(KU812)模型评价糖基化联合磷酸化修饰...