在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到组织来源、细胞类型和培养条件等因素的影响,因此可能表现出...
细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 1实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养...
1)直接传代时,静置5-10分钟,待悬浮细胞慢慢沉淀到器皿底部后,吸掉1/2-2/3原培养液,补足新鲜的含血清*培养液,混匀成细胞悬液。按各细胞指引推荐的传代比例,把细胞悬液均匀分到各培养器皿中,轻轻摇晃混匀。 2)离心传代时,将细胞连同培养液一并转移到离心管内,800-1000rpm离心3-5分钟,移弃上清后,加入新鲜...
8. 弃去上清液,加入适当体积的培养液,用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 9. 将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中,加入适量培养基旋紧瓶盖。 10. 显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察细胞量,必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长,传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。 11. 继续培养:用...
复苏是指冻存的细胞被解冻、恢复生长和增殖的过程。具体步骤如下: 1.细胞解冻:将冻存的细胞管迅速取出,直接放入37摄氏度的水浴中,轻轻摇动直至融化。 2.加热离心:将解冻的细胞液转移到新的离心管中,离心5分钟。去除上清液后,加入预暖的培养基轻轻悬浮细胞。 3.细胞计数与铺板:将悬浮的细胞进行计数,根据需要将细...
细胞的传代培养、冻存和复苏 本次课内容 细胞传代培养 传代细胞的生长规律 细胞的冻存 细胞的复苏 细胞传代培养 概念:培养的细胞由于细胞增殖,数量增加,细胞难以继续生长繁殖,需要进行分瓶培养,将培养的细胞分散,以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养,也叫做继...
1.2 细胞复苏培养 (1)根据细胞冻存记录取出需要复苏的细胞。 (2)迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动, 使管中的液体迅速融化。 (3)约 1-2 min 后冻存管内液体完全溶解,取出放入离心机中以 1000 rpm/min 速度离心 3~5 min。 (4)用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入生物安全...
实验细胞冻存细胞培养传代培养复苏培养传代细胞的实验四 系统标签: 细胞冻存传代复苏代培存液 念:概培细的细胞由于细胞增殖,量增加,细胞细以细细数生细繁殖,需要细行分培细,培细的细胞分散,以瓶将1:2或l:3以上的比率细移到外的容器中细行培细,细细代另即培细,也叫做细代培细 一般细胞可细代10-50代。
细胞复苏操作示意图 传代 一、 贴壁细胞传代操作步骤 1.用移液管或者巴氏吸管吸取培养液; 2.使用不含钙镁离子的平衡盐溶液(PBS)冲洗细胞1-2次; 3.弃PBS,加入胰蛋白酶-EDTA消化液(消化液浓度根据各细胞不同有调整),轻轻摇晃培养瓶,使胰酶与细胞表面充分接触,37 ℃孵育2-3 min,加入含血清完全培养基终止消化。
4.细胞冻存 5.细胞复苏 ;细胞传代;细胞传代的环节(贴壁细胞为例);细胞传代的环节(贴壁细胞为例);细胞处理过程;;细胞铺板;培养器皿;细胞培养板中加入细胞的数量,需要考虑一下几点: 1.常规试验的设计:转染siRNA(约30%-50%),转染质粒(约70%-80%),还要综合考虑转染试剂对细胞密度的规定等。 2.细胞生长的速度...