同源重组法（homologous recombination）是将外源性目的基因定位导入受体细胞的染色体上，通过与该座位的同源序列交换，使外源性DNA片段取代原位点上的缺陷基因，达到修复缺陷基因的目的。从而避免了因随机插入得不到调控和表达，以及激活或失活插入位点附近的基因等麻烦问题。术语简介 同源重组反应通常根据交叉分子或Holliday...
首先,同源重组法可以实现精确的基因修饰,避免对其他基因的影响。其次,同源重组法可以通过克隆扩增等手段,快速扩大所需基因片段的数量。此外,同源重组法还可以应用于多种生物体,包括真核生物和细菌等。 然而,同源重组法也存在一些挑战和限制。首先,同源重组法需要设计和合成同源片段,这对于大片段的基因组重组来说可能具...
顾名思义,同源重组就是利用同源片段将目的基因截短、删除或者替换,使基因失活从而实现敲除的目的。 这里,以细菌为例,介绍用敲除质粒将基因截短的原理,过程可以分为两大部分:单交换(发生一次交换)和双交换(发生两次交换)。 这里用蓝色表示基因组...
一、同源重组定义 二、同源重组特征 1. 涉及同源序列间的联会配对,且交换的片段较大; 2. 涉及DNA分子在特定的交换位点发生断裂和错接的生化过程异源双链区的生成; 3. 存在重组热点; 4. 需要重组酶; 5. 单链DNA分子或单链DNA末端是交换发生的重要信号。
同源重组法构建质粒是将目的DNA片段与载体DNA片段的两端引入相同的特定序列,通过无缝克隆或重组酶克隆技术,使两个具有完全相同的核苷酸序列之间发生交换,从而实现目的基因与载体的重组。重组反应不需要对于目的基因进行酶切,可以选择载体上的任意酶切位点。 实验步骤 ...
同源重组是指两段DNA序列在部分或完全同源的情况下，在体外进行重组或修复的过程。在质粒构建中，同源重组常常用于构建特定序列在3'或5'端带有限定酶切位点的质粒。其基本原理如下：1.设计引物和扩增片段：根据需要构建的质粒和目标DNA序列，设计引物使其能够扩增目标DNA序列。在设计引物时，通常需要在引物的3'端或5...
同源重组法可以用于制造基因突变、研究蛋白质结构和功能、制造转基因生物等方面。下面将从原理、步骤、应用等方面详细介绍同源重组法。 一、原理 同源重组法是利用两个相似但不完全相同的DNA序列进行交换来实现基因突变或转移的技术。其原理是利用同源性使两个DNA分子在某些区域上发生配对并形成交叉点,然后通过切割和...
当DNA 发生双链断裂时,细胞失去了通过同源重组(HR)的方式对断裂进行修复的能力,即为同源重组修复缺陷(Homologous recombination deficiency ,HRD)。 HRD 在不同肿瘤中都有发生。常见的包括卵巢(14.1%),膀胱(9.7%),乳腺(8.0%),子宫内膜(7.4%),前列腺(7.1%)和胰腺(6.5%...
同源重组法克隆在疫苗研发中有应用。助力新型疫苗的抗原基因克隆。该方法在基因治疗领域也有潜力。用于构建携带治疗基因的载体。不同物种的同源重组效率有差异。实验前需对相关物种特性有了解。优化实验条件能提高重组成功率。多次重复实验可保证结果可靠性。实验记录要详细准确便于后续分析。研究人员需具备扎实的分子生物学...