IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ基因载体DNA)以lacZ缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外,它...
X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验步骤 1.首先将X-Gal制成20 mg / ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(在-20°C下黑暗保存),然后将200μl的上述溶液和100μl的上述溶液添加到100 ml琼脂培养基IPTG中(24 mg / ml)和100μlAmp(100 mg / ml)制成X-Gal,IPTG,Amp平板培养基,将DNA片段插...
X-Gal是β-半乳糖苷酶的底物,水解后呈蓝色。基于此功能,当以lacZ缺陷型细胞为宿主转化pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ基因的载体DNA)时,或者当用X13 Gal和IPTG进行M13噬菌体载体DNA转染时,由于α β-半乳糖苷酶的互补性可以根据是否存在白色菌落(或噬菌斑)轻松选择基因重组体。
IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml 直接涂板法: 取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。 预制板: 倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。 注意: 1、X-gal不...
X-GAL-IPTG即用型溶液(生物技术级)订购信息 PRODUCT CODE SIZE STORAGE N714-1.5ML 1.5ML Cold N714-10ML 10ML Cold 公司简介 北京杰辉博高生物技术有限公司依托*重点实验室建立,是由具有资深生命科学、生物技术背景及留学归国人员共同创办的高新技术企业。 公司专业经营生物科学领域的实验仪器、研究试剂和实验室耗材...
IPTG为安慰性诱导物,X-gal为生色底物,二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG可诱导载体Lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补(α 互补)。实现α互补的细菌铺在含有X-gal生色底物的培养基上,可形成蓝色菌落。外源DNA插入质粒的多克隆位点后可破坏α互补...
X-Gal的作用机理及IPTG-X-gal片剂的生产方法实验注意事项 1.培养噬菌体时,在顶级琼脂中的添加量为:50μl/ 3 ml(20mg / ml)。2.含X-Gal的培养基应在4℃的黑暗环境中保存,必须在1-2周内使用。3.为便于实验操作,还可以根据细菌溶液的体积和板数来计算X-gal和IPTG储备溶液的浓度,并直接添加到准备...
首先把X-Gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(-20℃避光保存),然后在100 ml的琼脂培养基中,加入200μl的上述溶液、100μl的IPTG(24 mg/ml)和100μl的Amp(100 mg/ml),制作成X-Gal、IPTG、Amp平板培养基。当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化至lacZ缺失细胞中后,涂...
细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生...
基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组 体。