在进行Western Blot检测时,明智的做法是一步一步地进行操作。要成功地进行Western Blot,每一步都不应该被忽视。包括:(1)WB缓冲液制备,(2)样品制备,(3)凝胶电泳,(4)蛋白转移,(5)封闭,(6)抗体培养,(7)WB检测与成像,(8)数据分析。 (图1 western blot大概的一个流程示意图) 1.1 凝胶电泳(Gel Electrophoresi...
内参蛋白选择指南▼▼ 注意:没有一种内参蛋白,适用于所有样本的Western Blot,要根据自己的样本选择合适的内参。 洗涤▼▼ 洗涤缓冲液 建议使用TBST进行抗体稀释和洗涤。洗涤三次,每次5-10分钟。 对于图中所有抗体,TBST比PBST可以产生更强的信号。 二抗孵育▼▼ 较强的封闭剂稀释二抗可降低背景,建议用含5%脱脂奶粉...
接着是保证蛋白浓度，即要加入适量的裂解液，太少会使蛋白提取不充分，太多则蛋白浓度太低，一般经验是...
蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即 Western Blot,其工作原理是经过 PAGE(根据分子大小)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,然后将目的蛋白与特异性抗体进行孵化。由于抗体只与目的蛋白结合,未结合的抗体被洗掉,只留下与目的蛋白结合的抗体。最后通...
一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
在进行Western Blot检测时,明智的做法是一步一步地进行操作。要成功地进行Western Blot,每一步都不应该被忽视。包括:(1)WB缓冲液制备,(2)样品制备,(3)凝胶电泳,(4)蛋白转移,(5)封闭,(6)抗体培养,(7)WB检测与成像,(8)数据分析。 (图1 western blot大概的一个流程示意图)...
蛋白质免疫印迹法，即Western Blot，基本原理涉及通过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）对蛋白质样品进行分离，随后将其转移至固相载体，如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质，同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中，固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原，与相应...
图 1. Western blot 的流程图[2]1.万丈高楼第一步：准备材料 要想实验节奏稳，准备工作那可要妥妥...
Western Blot实验原理 蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 实验步骤 1. 样本制备 1)融解RIPA裂解液(RIPA裂解液-细胞/组织裂解液缓冲液),混匀。取适当量的裂解...
Western Blot 又称为蛋白质印迹,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗原抗体之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。 其基本原理为:聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离,分离后的蛋白被转移到固相支撑物(杂交膜)上,一抗特异性识别目标蛋白,通过HRP、AP、生物素、地高辛或者荧光...