1.显影的原理Western Blot实验的最后一步,是显影。拿到高特异性、低背景的显色图像,这一步至关重要。 显色的原理是实验中的二抗被HRP(辣根过氧化物酶)标记,可采用增强化学发光法(ECL)。ECL灵敏度高、重复性好,是目前主流的WB显色方法。 2.具体显影步骤 ▲(1) 在避光环境中,将 ECL 化学发光试剂 A 液
图1.Western blot实验流程图 2.1 蛋白质的提取 成功提取出高质量的蛋白，WB实验便成功了一半。接下来，我们先看看蛋白质如何提取。由于质粒或者病毒载体携带的外源基因转染细胞后36-48小时左右达到表达高峰，因此建议在这个时间收集并裂解细胞。具体步骤如下：① 裂解细胞：裂解过程中一般会用到RIPA裂解液（其原理是...
最终，通过底物显色或放射自显影技术，我们可以清晰地检测到电泳分离的特异性目的基因所表达的蛋白成分。图1展示了Western Blot技术的原理示意图。若您对如何更高效、便捷地完成实验感兴趣，或希望寻求专业的实验支持，请随时联系我们。我们的团队将竭诚为您解答疑惑，并为您提供详细的实验方案与合理报价。实验步骤详解（...
Western blot实验原理 Western blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过跑蛋白凝胶电泳,分离蛋白质样品,然后将凝胶转移到某种固相载体(如PVDF膜)。这个固相载体能以非共价键形式吸附蛋白质,同时能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以载体上的蛋白质或多肽作为抗原,在载体上孵育上对应的抗体进行免疫反应,然后再孵育...
Western Blot技术，也被称为蛋白质免疫印迹法，其核心原理在于通过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）将样品中的蛋白质进行分离。随后，这些分离出的蛋白质被转移到固相载体上，例如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜，且在整个过程中蛋白质的类型及其生物学活性都得到了保持。接下来，膜上的蛋白质作为抗原与一抗发生特异性...
实验原理 蛋白质免疫印迹法，即Western Blot，基本原理涉及通过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）对蛋白质样品进行分离，随后将其转移至固相载体，如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质，同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中，固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原...
Western blot技术全解析：从原理到操作步骤 Western blot技术概述 Western blot是一种用于检测特定蛋白的技术，通过电泳将蛋白转移到固相支持物上，利用抗体进行检测，揭示特异蛋白的类型和表达量。该技术主要用于鉴别和半定量分析细胞或组织提取的蛋白混合物中的特异蛋白。西方墨点印迹法包含以下关键步骤：制备样品、蛋白...
这一步骤在Western Blot实验中至关重要，因为大多数优化条件都需在此进行调整。一抗与抗原的结合效果会受到多种因素的影响，如封闭剂的类型、孵育的温度和时间、一抗的使用浓度以及一抗的质量。7 二抗孵育PVDF膜 在将一抗孵育的PVDF膜用TBST洗涤三次，每次持续5分钟后，使用二抗工作液在室温下孵育PVDF膜1小时。需...
详解WB实验基本原理及操作步骤 一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法...