1). 用双蒸水配制100 mM 正矾酸钠溶液;2). 用盐酸HCl 调至pH 9.0;3). 煮沸至溶液无色,尽量减少水分挥发;4). 冷却至室温;5). 再调pH 至 9.0;6). 再煮沸至无色;7). 重复上述过程,直至溶液煮沸冷却后达pH 9.0;8). 用水定容至原体积;9). 分装保存于- 20°C. 溶液变黄则弃之不用。 1-3 ...
1)30%丙烯酰胺/0.8% N,N’-亚甲丙烯酰胺 将30 克丙烯酰胺和 0.8 克 N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的水中,加热至37℃溶解之,补加水至终体积为 100ml。0.45µm 微孔滤膜过滤除菌,查证该溶液 pH 应不大于 7.0,置棕色瓶中保存。 小心:丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收,其作用具有...
大家好,上一期研小编给大家分享了一些Western Blot 实验的常见问题及解决方法,今天我们又为大家送上热腾腾的WB 实验干货系列,一起来学习吧。 01 实验结果条带大小与理论值不符 原因一:Marker指示大小偏差 解决方法:选择合适的预染Marker,并与非预染Marker对比,观...
Western Blot,即蛋白质免疫印迹实验,常用于检测单克隆或多克隆抗体识别的特异抗原。其为分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定...
Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。基本原理包括蛋白质电泳、抗原抗体特异性反应及辣根过氧化物酶(HRP)催化显色等。Western Blot可以通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
Western Blot辣根过氧化物酶法(HRP)碱性磷酸酶法(AP)化学发光显色法(HRP) Western Blotn碱性磷酸酶可以将无色的底物5-溴-4-氯吲哚磷酸盐(BCIP)转化为蓝色的产物;n辣根过氧化物酶可以以H2O2为底物,将3-氨基-9-乙基咔唑TMB氧化成褐色产物或将4-氯 25、萘酚氧化成蓝色产物。n另一种检测辣根过氧化物酶的方法...
Western Blot主要步骤包括蛋白提取-电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-显影曝光等步骤,现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。 WB图解 2.WB试剂配制 2.1 TBST(10X 缓冲液 1L):Tris base,24 g;NaCl,88 g
Westernblot实验技术 Westernblot实验技术定义:印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年,Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上,并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法,称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法,对RNA和蛋白质进行印迹分析,对RNA...
Western Blot 原理和操作方法(详细) 工作原理 蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg),...
Western blot 实验原理 • Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物 是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经 过PA G E 分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如 N C 膜) 上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳 分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋 白质或...