大家好,上一期研小编给大家分享了一些Western Blot 实验的常见问题及解决方法,今天我们又为大家送上热腾腾的WB 实验干货系列,一起来学习吧。 01 实验结果条带大小与理论值不符 原因一:Marker指示大小偏差 解决方法:选择合适的预染Marker,并与非预染Marker对比,观...
Western Blot实验是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,其操作流程长,从样本制备、SDS-PAGE胶配制、电泳、转膜、封闭、抗体选择到显影等各环节,每一步操作都会对结果产生直接影响,研小编给大家总结整理了一些实验影响因素,快点学起来吧!WB实验的基本...
2.置膜于25 ml 封闭缓冲液中1h, 室温,摇动。 3.15ml TBS/T洗3次(5 min/T)。 4.加入合适稀释度的一抗,室温孵育1-2h或4°C过夜,缓慢摇动。 5.15 ml TBS/T洗3次(5 min/T)。 6.加入合适稀释度的碱性磷酸酶(AP)或辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗,室温孵育1h,缓慢摇动。 7.15 ml TBS/T洗3次(5 min...
1)30%丙烯酰胺/0.8% N,N’-亚甲丙烯酰胺 将30 克丙烯酰胺和 0.8 克 N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的水中,加热至37℃溶解之,补加水至终体积为 100ml。0.45µm 微孔滤膜过滤除菌,查证该溶液 pH 应不大于 7.0,置棕色瓶中保存。 小心:丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收,其作用具有...
Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。基本原理包括蛋白质电泳、抗原抗体特异性反应及辣根过氧化物酶(HRP)催化显色等。Western Blot可以通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
WesternBlot基本原理 在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移(zhuǎnyí)至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。精品文档 WesternBlotting方法一:(fāngfǎ)直接法 优点：1.快速（一种抗体）2.没有二抗交叉反应引起的非特 异性条带 缺点：1.免疫反应性降低2.无信号二级放大3.抗体标记费时昂贵,...
原理Western Blot 的基本原理包括三个主要步骤:电泳分离、转膜和免疫检测。电泳分离电泳分离是Western Blot的第一步,其目的是将蛋白质根据分子量大小进行分离。样品中的蛋白质在电场作用下移动,较小和较大的蛋白质移动较快和较慢。通过这种方式,不同大小的蛋白质被分离并在凝胶上形成条带。转膜转膜是将电泳分离后的...
Western-Blot原理、显色(xiǎn sè)分类及操作步骤 WesternBlot原理、显色(xiǎn sè)分类及操作步骤(2008-08-14 23:07:59) 标签:westernblot显色教育 一、原理 与Southern或Northern杂交方法(fāngfǎ)类似,但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。
转膜n要将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如NC膜)上,通常有两种方法:毛细管毛细管印迹法和电泳印迹法印迹法和电泳印迹法。n常用的电泳转移方法有湿转和半干转湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。 n最常用于最常用于 9、Western Blot的转移膜主要是...