western-blot化学发光(ECL)出现非特异性条带,怎么办? 出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面: 1.蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2.一抗是多克隆抗体,或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体,或降低抗体浓度,缩短抗体孵育时间,优化一抗和二抗的使用浓度。 3.洗膜不充分。可增加洗膜次数和...
做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生,经常有朋友反映,加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光,可亮光很快就消逝了,压完片后,条带却很弱,甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么? 要解释这种情况发生的原因,必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的...
3.本底或背景低,这是发展的方向之一,由于化学发光反应对增高本底的因素很敏感,因此,化学发光分析欲得到准确可靠的结果,就必须确保试剂的特异性,在无HRP或很少HRP的情况下,不发光或很少发光。 所以,Western Blot“淬灭”的原因主要在两方面:含HRP的抗体和发光试剂...
WB (Western Blot) 学习笔记——ECL法 蛋白质印迹 (Western blot, WB) 是一种通过凝胶电泳分离蛋白质,将其印迹转移到膜上,并对固定抗原进行选择性免疫检测的技术。这是一种重要的常规蛋白质分析方法,依赖于抗体-抗原相互作用的特异性,对于从复杂混合物中定性或半定量鉴定特定蛋白质及其分子量非常有用。 原理: E...
印迹(Blotting)是将大分子(蛋白质,核酸等)从凝胶转移到固定膜的固体表面以检测已转移的分子的过程,Western blot是一种使用特定抗体来识别凝胶电泳分离的蛋白质的技术。 什么是Western Blotting? 蛋白质印迹(Western Blotting)原理为利用电泳分离蛋白质,接着将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法,通过分析条带...
蛋白质免疫印迹(Western Blot )可以: (1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质; (2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况; (3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。 实验方法原理———底物化学发光 ECL 法 Western 免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行...
ECL(electrochemiluminescence)是一种化学发光试剂,一般是Western blot实验中的最后一步,需要1:1混合溶液A和溶液B(一般使用的发光液A和B分别为鲁米诺和过氧化氢),混合液均匀覆盖PVDF膜,成像仪曝光后可显色观察实验结果。 鲁米诺是一种重要的化学发光试剂,它的氧化反应需要在碱性缓冲液中进行,在过氧化氢存在下形成...
蛋白质免疫印迹(Western Blot )可以: (1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质; (2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况; (3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA 相互作用后续分析。 实验方法原理———底物化学发光 ECL 法 Weste...
When the double-blot membrane is probed with the secondary antibody, no other proteins are present to bind nonspecifically, thus eliminating the background problem (refer to Protocol 1.6. Double Blotting Procedure, page 43). “Double blotting” has also been used in the detection of transthyretin...
Westemblot是常用的进行差异蛋白验证方法之一。在血浆Westemblot 实验中,选择合适的内参对、Ⅳestemblot验证结果的准确性尤为重要。 p.actin是一种重要的细胞骨架蛋白,广泛分布于细胞浆内,在各组织 和细胞中的表达丰富且相对恒定,是组织和细胞样品中常用的内参。