原理：通过电泳区分不同的蛋白组分，并转移至固相支持物，通过特异性抗体作为探针，对靶蛋白进行检测。用...
Western blot的基本原理可以分为以下几个步骤: 蛋白质分离:通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对样品中的蛋白质进行分离,依据蛋白质的分子量进行分离。 转膜:将分离后的蛋白质转移到固相支持物(如PVDF或硝酸纤维素膜)上,使蛋白质在膜上固定。 封闭:用不含目标蛋白的蛋白质(如牛血清白蛋白BSA或脱脂奶粉)封闭膜上的非特...
一、Western Blot 原理 Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽...
我要特别强调的是,实验室里最贵的抗体实际上是内参抗体,因为只要Western Blot开工,每次都得用内参抗体,而一般目的蛋白的抗体也就用几次,重复三次就了事。但内参抗体是不折不扣的耗材,严格意义上将,每跑一次胶,就得杂一次内参,使用频率最高决定了内参是最花钱的...
一、实验原理 Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被...
Western Blot实验原理指在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体,然后用这种多肽的特异抗体来检测。具体是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳, 对不同分子量的蛋白质进行分离,将分离到的蛋白质通过转移电泳方式转印至固相支持物,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印膜进行反应,使其与膜...
Western blot是一种基于抗原抗体特异性反应的蛋白质检测技术,其核心原理是通过电泳分离、转膜固定和免疫检测三个关键步骤实现对特定蛋白质的定性与定量分析。该技术能够从复杂混合物中精准识别目标蛋白,广泛应用于分子生物学和医学研究领域。 一、凝胶电泳分离 Western blot的第一步是SDS-聚丙...
Western Blot原理 Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE可对蛋白质样品进行分离，转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜（NC）上。固相载体可以吸附蛋白质，并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的NC膜就称为一个印迹（blot），...
🎯 实验原理 Western Blot的主要目的是对蛋白表达进行定性或粗定量。定性是通过观察处理后与未处理相比,某个蛋白是否表达;粗定量则是通过观察某个蛋白表达量的显著升高,表现为条带变粗。检测已知蛋白和未知蛋白的方法类似。对于已知蛋白,根据目的蛋白选择相应的抗体,抗体与目的蛋白特异性结合后,通过引入带有标签的二抗...