步骤:1.样品制备;2.SDS-PAGE电泳分离;3.转膜(蛋白转移至PVDF或NC膜);4.封闭(使用脱脂牛奶或BSA);5.一抗孵育;6.二抗孵育(标记酶/荧光物质);7.化学发光或显色检测 判定命题有效性:①题设明确要求简述Western blot的核心原理和关键步骤,无歧义;②知识点属于分子生物学常规内容,具有标准答案规范。知识验证流程:①确认原理需包含三个要素:
与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或...
原理:通过电泳区分不同的蛋白组分,并转移至固相支持物,通过特异性抗体作为探针,对靶蛋白进行检测。 用途:定性检测,判断目标蛋白有无表达,目标蛋白分子量大小。常配合ELISA、FACS、IHC、IF等手段使用。 WB标准流程:样本制备→凝胶电泳→蛋白转膜→封闭→抗体孵育→检测显影 Part.1 样本制备 1)实验前需要了解的重要信息...
一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。 以固相载体...
实验原理 蛋白质免疫印迹法，即Western Blot，基本原理涉及通过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）对蛋白质样品进行分离，随后将其转移至固相载体，如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质，同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中，固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原...
原理 Western Blot技术，也被称为蛋白质免疫印迹法，其核心原理在于通过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）将样品中的蛋白质进行分离。随后，这些分离出的蛋白质被转移到固相载体上，例如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜，且在整个过程中蛋白质的类型及其生物学活性都得到了保持。接下来，膜上的蛋白质作为抗原与一抗发生...
Western blot是一种用于检测特定蛋白的技术，通过电泳将蛋白转移到固相支持物上，利用抗体进行检测，揭示特异蛋白的类型和表达量。该技术主要用于鉴别和半定量分析细胞或组织提取的蛋白混合物中的特异蛋白。西方墨点印迹法包含以下关键步骤：制备样品、蛋白提取、SDS-PAGE电泳、电转、封闭、抗原-抗体反应以及最后的蛋白检测...
一、实验原理 Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被...
Western blot原理及实验方法 一、 原理 Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质。“经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上...