原理:通过电泳区分不同的蛋白组分,并转移至固相支持物,通过特异性抗体作为探针,对靶蛋白进行检测。 用途:定性检测,判断目标蛋白有无表达,目标蛋白分子量大小。常配合ELISA、FACS、IHC、IF等手段使用。 WB标准流程:样本制备→凝胶电泳→蛋白转膜→封闭→抗体孵育→检测显影 Part.1 样本制备 1)实验前需要了解的重要信息...
一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
2) 显影,定影: 取出X-film置于显影液中一定时间后(视目的条带强度与背景而定),水洗一次再置于定影液中定影5min以上。 (当然,随着时代的进步,现在很多实验室很少用古老的胶片显影定影。用在最后的发光二抗孵育后,直接扫描。这类仪器很多,操作方法看不同实验室的配置)...
一、实验原理 Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被洗...
实验原理 蛋白质免疫印迹法，即Western Blot，基本原理涉及通过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）对蛋白质样品进行分离，随后将其转移至固相载体，如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质，同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中，固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原...
Western Blot实验原理指在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体,然后用这种多肽的特异抗体来检测。具体是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳, 对不同分子量的蛋白质进行分离,将分离到的蛋白质通过转移电泳方式转印至固相支持物,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印膜进行反应,使其与膜...
1.原理。 Western blot的原理基于蛋白质的电泳分离和免疫检测。首先,待检测的蛋白样品经过SDS-PAGE凝胶电泳分离,然后将分离后的蛋白转移到膜上。接着,膜上的蛋白与特异性抗体结合,再经过化学发光或染色等方法来检测目标蛋白的存在和表达水平。 2.步骤。 (1)蛋白样品制备,将待检测的蛋白样品加入SDS-PAGE凝胶电泳缓冲...
1、Western blot 原理 分类 主要试剂 操作步骤 常见问题原理 Western Blot(蛋白免疫印迹)采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型...