一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。 以固相载体上的蛋
实验原理 蛋白质免疫印迹法,即Western Blot,基本原理涉及通过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)对蛋白质样品进行分离,随后将其转移至固相载体,如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质,同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。 在该过程中,固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原,与相...
这一技术起源于Southern的DNA印迹研究，随后又发展出了Northern blot（RNA印迹）和western blot（蛋白印迹）。Western blot技术，则以其独特的抗体识别机制，广泛应用于凝胶电泳分离的蛋白质的检测中。而在此之前，我们需先了解SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳），通常简称为聚丙烯酰氨凝胶电泳。那么，SDS和...
若实验对象为细胞：对于悬浮细胞和贴壁细胞，提取蛋白上清液的步骤有所不同。对于悬浮细胞，可直接进行裂解和离心操作；而对于贴壁细胞，则需先使用细胞刮刀将其从培养皿或培养瓶上刮下，再进行裂解和离心。①细胞收集与裂解：将细胞悬液转移到离心管中，以5000rpm的速度离心，去除上清液。随后，加入1ml PBS缓冲液，...
Western Blot技术，也被称为蛋白质免疫印迹法，其核心原理在于通过SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）将样品中的蛋白质进行分离。随后，这些分离出的蛋白质被转移到固相载体上，例如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜，且在整个过程中蛋白质的类型及其生物学活性都得到了保持。接下来，膜上的蛋白质作为抗原与一抗发生特异性...
蛋白质免疫印迹法，即Western Blot，基本原理涉及通过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）对蛋白质样品进行分离，随后将其转移至固相载体，如硝酸纤维素薄膜（NC膜）或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质，同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中，固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原，与相应...
接下来我们看下Western blot的电泳装置: 注意上图中红线所指的区域,有一个橡胶垫,橡胶垫的结构从侧面看如上面有图所示。然后漏液的真谛就在下图: 我们在安置胶板的时候很可能忽略了上述的问题,没有将胶的玻璃短板紧紧接触橡胶条,因此液体就慢慢从玻璃短板两...
全程剖析Westernblot原理,你才能掌控它。 上上期,小编突然地推出了Western blot(WB)最全避雷手册,反响不错。 同时,有人在后台私信小编,说他(她)的朋友最近被WB烦的不行,希望能够再出几期,解答他们在WB中遇到的难题。 小编思考后觉得,应该从WB原理开始,一步一步捋下来,所谓知其然而知其所以然。 让我们红尘作...
Western blot 是对目的蛋白进行检测的一种实验方法,大致分为以下7步:蛋白提取、蛋白定量、SDS-PAGE电泳、电转、封闭、抗原-抗体免疫反应、蛋白检测。 为此,本期内容从头到尾剖析WB原理,希望为大家答疑一二。 01 蛋白提取 常规的样品无外乎3种,分...