发布于 2023-11-16 23:45・IP 属地湖北 western 蛋白定量 打开知乎App 在「我的页」右上角打开扫一扫 其他扫码方式:微信 下载知乎App 开通机构号 无障碍模式 验证码登录 密码登录 中国+86 登录/注册 其他方式登录 未注册手机验证后自动登录,注册即代表同意《知乎协议》《隐私保护指引》...
1.样品制备:使用合适的裂解缓冲液将细胞裂解，并使用蛋白质浓度测定方法（例如BCA或Bradford法）测定蛋白质总浓度。2.SDS-PAGE:根据预期的蛋白大小选择适当的凝胶，并加载相同量的总蛋白至各通道。3.转印:将SDS-PAGE上的蛋白转移到PVDF或nitrocellulose膜上。4.封闭:使用非特异性的蛋白（如脱脂牛奶或BSA...
1.蛋白提取过程需要冰上操作,尽可能减少蛋白降解; 2.尽可能采用简单方法,以避免蛋白丢失; 3.低温和蛋白酶抑制剂可防止蛋白质的降解; 蛋白浓度测定: 蛋白样品在进行SDS-PAGE电泳等实验研究之前要进行精确的定量,以保证同一实验中不同样品之间上样量的一致性以及结果可比性。因此,蛋白浓度测定是研究蛋白中最常用、最...
目前常用的蛋白定量方法有：BCA蛋白定量法和Bradford蛋白定量法。BCA蛋白定量法原理是什么？在碱性条件将Cu...
实验操作演示视频:Western Blot 原理 蛋白质在SDS的作用下,全部都带上相同的负电荷,然后在凝胶里面进行电泳,分子量越小,逃跑的越快,这样子待检测的蛋白(目的蛋白)就集中逃跑在某一水平线。然后把蛋白质从凝胶转移到膜上,因为凝胶太软容...
Wes全自动蛋白质免疫印迹系统采用革新的Simple Western技术，颠覆30多年传统的Western Blot方法，实现在同一根样品管中完成样品分离、捕获、固定，免疫检测和定量分析。1、不用制胶和跑胶，不用转膜，减少实验步骤，避免样品损失，避免人工误差的引入，提高结果稳定性。2、自动进行一抗二抗孵育和化学发光检测，自动进行...
蛋白定量-BCA法(南京建成试剂盒) 一、实验仪器: 试管、微量移液器、旋涡混匀器、37℃水浴箱(气浴箱)、可见分光光度计(562nm) 二、适用范围: 本试剂盒可测各种动物血清(浆)、组织、培养细胞、细胞培养上清及植物等样本中的蛋白含量。 三、试剂组成及配制 试剂一:粉剂2支、稀释液12.5 ml 2瓶 试剂一应用液的...
二、Western Blot实验流程 1.蛋白质提取 根据目标蛋白所在的位置(核蛋白、膜蛋白、线粒体蛋白等),采用不同的缓冲液和条件进行蛋白质的提取。 2.蛋白质定量 使用BCA或Bradford等方法对提取的蛋白质进行定量,确保每个样本的蛋白质浓度一致。 3.凝胶电泳
使用胶片或数字成像系统捕获Blot图像。2.选择合适的软件:如ImageJ、Quantity One等进行图像分析。3.背景减去:选择一个没有条带的区域作为背景,使用软件减去背景。4.条带定量:使用软件工具选择每个条带,并测量其灰度值。5.正常化:通常使用内部标准如β-Actin或GAPDH等来正常化所感兴趣的蛋白条带的强度。6.数据分析...
WB是一种半定量和定性分析目的蛋白样品的生物实验手段。本实验方法以分析变性蛋白样品为例简单叙述了一下WB的一些操作过程及原理。Day 1 细胞铺板：细胞铺6孔板（推荐铺板密度：50%的细胞密度），无抗完全培养基。Day 2 转染：推荐一个孔的转染体系 转染前将六孔板中旧的培养基弃掉，加入500 μL/孔的无血清DMEM...