THP-1诱导完成后可通过流式和免疫荧光、ELISA或特异性标记物(如IL1、IL10、精氨酸酶)的基因表达分析来评估向M1和M2型巨噬细胞的正确分化,并且从形态上也可以看出来,都是最基础的鉴定方法,这就不一一述来了。 PMA刺激后的THP-1 THP-1细胞的诱导的M1形态(PMA) Thp-1细胞诱导的M2形态(PMA) THP-1诱
(2)诱导培养:将已经诱导成的巨噬细胞上清弃除,加入诱导培养基(6孔板,每孔2mL)培养48h,诱导其向M2极化。48h后,显微镜下观察M2细胞是否构建成功;(3)最后,在无刺激物和无PMA的情况下,用无血清RPMI-1640基础培养基重悬细胞,可保持72h。THP-1极化进入M1和M2巨噬细胞图 M1型形态多样,伪足较多,分叉...
首先,THP-1诱导分化为巨噬细胞这个实验真的是很难做,THP-1是本实验最大的变量,以本人经验 1.M1诱导是比较稳定的,CD86表达85%以上,CD86的极化程度和LPS浓度相关2.M2比较难诱导,比例10%左右,文献报道,降低PMA的浓度、M0后静息,有利于M2方向诱导3.细胞因子严格分装,勿反复冻融,以减少实验的干扰项4.实在不行,...
THP-1可以被诱导分化为巨噬细胞M1和M2,并释放相应的细胞因子[1,2];THP-1首先被佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞,随后进行下一步极化:巨噬细胞M1极化:通过脂多糖(LPS)和IFN-γ诱导M1极化,释放出TNF-α、IL-6等细胞因子,这是典型的炎症模型。巨噬细胞M2极化:通过 IL-4 、IL-13和巨噬细胞集落刺激...
THP-1是人急性单核细胞白血病细胞,是单核-巨噬细胞相关研究中的常用细胞系工具,可通过PMA(佛波酯)诱导分化为M0型巨噬细胞,然后根据实验需求进一步诱导为M1或M2型巨噬细胞。 细胞形态:悬浮细胞,圆形,大小均一,小而透亮(下图Fig1来自ATCC网站)。 注意:显微镜下观察之前,可以轻轻晃动培养瓶或孔板,静置片刻后使得细胞...
的不同,分为M1和M2两种亚型。M1型巨噬细胞主要表现为促炎性 反应,而M2型巨噬细胞则具有抗炎和组织修复功能。因此,研究巨 噬细胞的分化和鉴定方法对于理解免疫应答和疾病治疗具有重要意 义。 本文主要探讨如何诱导THP1细胞分化为M1和M2型巨噬细胞,并对 ...
THP-1成巨噬细胞诱导分化试剂盒用于将THP-1细胞系分化为巨噬细胞(M1或M2型)。试剂盒包含细胞及各阶段诱导液。分化过程包括培养THP-1细胞,将THP-1诱导为M0型巨噬细胞,再进一步诱导细胞,使其极化为M1或M2型巨噬细胞。该试剂盒为科研提供了一种便捷、稳定的巨噬细胞模型获取方法。
图1. 巨噬细胞分化为M1和M2 PMA诱导THP-1步骤: 将处于对数生长期的THP-1细胞离心,用RPMI-1640培养基重悬; 加入PMA,显微镜下细胞计数,调整THP-1细胞密度为5*10^5/mL; 使PMA终浓度为100ng/mL,将细胞种入六孔板,每孔加入细胞2mL; 48h后,显微镜下观察巨噬细胞构建成功。
下图演示了如何将单核细胞分化为 M0/M1/M2 巨噬细胞。 (A)图是细胞表型变化的相差显微镜图像。可见,用200ng/mL PMA刺激 72小时后,悬浮的 THP-1 单核细胞分化为 M0 巨噬细胞,粘附在细胞壁上,并有伸展的突起。接着,再用20ng/mL IFN-γ和 100ng/mL LPS(诱导向M1分化) 或20ng/mL IL-4(诱导向M2分化...
肿瘤微环境模拟THP-1分化后的巨噬细胞可被“驯化”为两种类型:M1型(促炎):用细菌毒素LPS刺激,攻击癌细胞;M2型(抗炎):用IL-4诱导,帮助肿瘤逃避免疫监视。这种特性让科学家能研究肿瘤如何“策反”免疫细胞。药物筛选与毒性测试 评估化疗药是否损伤免疫细胞:比如检测顺铂对THP-1活性的抑制;开发纳米药物:用...