2.4 转染THP-1细胞系将获得的重组慢病毒转染THP-1细胞系，采用威尼德电穿孔仪进行电穿孔转染，以提高转染效率。转染后48小时，荧光显微镜观察并计算转染效率。通过嘌呤霉素筛选，建立FNDC5过表达的稳定转染细胞系。2.5 检测FNDC5表达情况将稳定转染的THP-1细胞系分为三组：空白组、空载组和FNDC5组。采用Western bl...
构建慢病毒表 达载体 pHR— L IL RB5, 与 p8. 91 和 pMD 共 同转入 293T 细胞 ,产生 标记有绿色荧光 的 L ILR B5 慢病毒 , 感染 单核细胞系 T HP一 1后 通过流式细胞 术检测 L IL RB5 的表达 。 示真核表达 载体 pE G FP— L ILR B5一 flag 的序列与预期相 符, 瞬时转染 pE GFP -L...
LILRB5的重组 慢病毒上清,收集含慢病毒颗粒的细 胞上清液,用0.45μm 滤器过滤上清液以去除所有细 胞及碎片,将 THP-1 细胞加入含病毒上清中 ,使 细胞 浓度为 5×105/ml,转染 48h 后更换为完全培养基, 继续培养 24h,收集 THP-1 细胞,利 用流式细胞术检 测 LILRB5-EGFP 在稳转细胞系 THP-1的表达。
目的:通过构建慢病毒介导的CD86过表达THP-1细胞,探究CD86过表达THP-1巨噬细胞在马尔尼菲篮状菌(Talaromycesmarneffei,TM)感染中作用. 方法:1.构建慢病毒介导的CD86过表达THP-1细胞:设计目的基因CD86序列引物,PCR扩增制备目的基因片段与线性化载体进行重组反应,获得高纯度慢病毒LV-CD86载体质粒后转染HEK293T细胞进行病毒...
包装成过表达慢病毒颗粒并测定病毒滴度.Western blot检测重组慢病毒中FNDC5的表达情况后,将获得的重组慢病毒转染THP-1细胞系,荧光显微镜观察并计算其转染效率.经嘌呤霉素筛选建立FNDC5过表达的稳转细胞系后,将细胞分为3组,分别为空白组...
2.根据权利要求1所述的一种慢病毒转染技术构建cd226分子高表达的thp-1细胞系的方法,其特征在于:所述的步骤1的2)中thp-1细胞细胞密度达到80%。 3.根据权利要求1所述的一种慢病毒转染技术构建cd226分子高表达的thp-1细胞系的方法,其特征在于:所述的步骤1的3)中需要提前1h更换新鲜的rpmi1640完全培养基。
构建慢病毒表达载体pHR-LILRB5,与p8.91和pMD共同转入293T细胞,产生标记有绿色荧光的LILRB5慢病毒,感染单核细胞系THP-1后通过流式细胞术检测LILRB5的表达。结果测序显示真核表达载体pEGFP-LILRB5-flag的序列与预期相符,瞬时转染pEGFP-LILRB5-flag的293T细胞可检测到绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术检测显示LILRB5-fla...
方法 将LILRB5 构建入真核表达载体 pEGFP_flag,膘时转染 293T细胞系,通过免疫荧光和流式细胞术检测 LILRB5-GFP和LILRB5_f1ag在293T细胞中的表达. 构建慢病毒表达载体 pHR_LILRB5,与p8-91和pMD共同转入 293T 细胞,产生标记有绿色荧光的 LILRB5慢病毒,感染单核细胞系 THP_1后通过流式细胞术检测 LILRB5 的...