THP1的慢病毒感染 4.提前4-5天复苏THP1,不要临时抱佛脚提前1天复苏,这样的状态不太行。细胞状态好的THP1是感染成功的关键。THP1复苏后把它丢在一边不要管他,笔者一般加6ml 1640全培。这里有个细节,水浴锅解冻后直接加入1640培基中,不要再去离心去除冻存液然后重悬这个操作了,THP1 不喜欢反复离心。 等到第4-5天
本研究通过在THP-1细胞中过表达WTAP,探讨了m6A蛋白在APS调节THP-1巨噬细胞炎症中的作用机制[1]。 为了研究黄芪多糖调节m6A修饰水平的机制,作者首先检测了黄芪多糖处理是否会影响脂多糖(Lps)诱导的THP-1巨噬细胞中m6A修饰系统相关蛋白的表达。如图1所示,APS处理24 h后,WTAP的mRNA表达明显降低,与其他相关蛋白相比,...
2.4 转染THP-1细胞系将获得的重组慢病毒转染THP-1细胞系，采用威尼德电穿孔仪进行电穿孔转染，以提高转染效率。转染后48小时，荧光显微镜观察并计算转染效率。通过嘌呤霉素筛选，建立FNDC5过表达的稳定转染细胞系。2.5 检测FNDC5表达情况将稳定转染的THP-1细胞系分为三组：空白组、空载组和FNDC5组。采用Western bl...
人源THP-1细胞过表达hLRRC77P基因 在人单核巨噬细胞(THP-1)中表达Human LRRC77P基因,采用广谱性EFS启动子,构建Human LRRC77P慢病毒载体,经病毒包装后转染细胞。 ● 实验组:LV-EFS>hLRRC77P>CMV>EGFP/T2A/Puro ● 对照组:LV-CMV>EGFP/T2A/Puro 过表达病毒转导THP-1细胞,药筛后获得过表达稳转株,各组...
SP110在THP1巨噬细胞中过表达模型建立及功能学研究.pdf,摘要 目的:构建SP110 基因过表达的人单核巨噬细胞THP-1细胞模型,体外感染结核分枝杆菌 H37Ra。初步探讨SP110基因在巨噬细胞抗Mtb 感染中的作用机制。 方法:①利用PCR法获取SP110基因序列,构建慢病毒载体LV5-SP110,
过表达LPXN的THP—l细胞增殖、对Fn的粘附、ERK,Integrin“,o【5和Bl表达均高于对照组。过表达LPXN的THP—l细胞跨transwell的侵袭能力和MMP2活性均强于对照组。结论:LPXN基因可能通过上调ERK的表达促进THP—l细胞增殖;通过上调Integrin ct4、a5、131的表达促进THP—l细胞的粘附;通过激活MMP2促进THP一1细胞侵袭。
THP-1hHNRNPA2B1KO基因过表达细胞传代培养 细胞消化:当细胞生长达到 80% - 90% 汇合度时,需要进行传代培养,以避免细胞过度生长导致营养缺乏和代谢产物积累。对于贴壁细胞,首先吸去培养基,用 PBS 缓冲液清洗细胞 1 - 2 次,然后加入适量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液,在 37℃下消化 1 - 5 分钟,期间不断观察...
( 1) /cjbcn 高雪明 等/人骨髓间充质干细胞过表达白细胞介素-34 对THP-1 细胞的调节作用 645 表 1 Real-time PCR 引物序列 6 mL2 000 r/min 15 min Table 1 Sequences of the primers for real-time PCR Primer name Primer sequences (5′–3′) PBS 2 IL-34-froward GCAGAATGAGGAGTGCACTG ...
摘要: 构建人IL-34真核表达载体并将其转染到人骨髓间充质干细胞,观察高表达IL-34的骨髓间充质干细胞对THP-1细胞的影响.PCR扩增IL-34 DNA,并将其克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP;将构建成功的重组体转染到骨髓间充质干细胞,Western blotting和ELISA分析IL-34在细胞中的表达;用高... 查看全部>> ...