首先,培养THP-1细胞,并使用诱导剂如Phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)进行极化。通常使用50 ng/mL或100 ng/mL的PMA处理24-48小时,以诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞。 处理后,移除PMA,并用新鲜培养基孵育24小时,让细胞恢复并达到M0状态。形态变化: 单核细胞THP-1在PMA诱导后,从悬浮式生长变为贴壁生长。细胞...
1.PMA诱导:通常使用佛波酯(PMA)将THP-1单核细胞分化为巨噬细胞样细胞。常用方法是将THP-1细胞与150 nM的PMA孵育24小时。之后,将细胞在RPMI培养基中继续培养24小时,以使其稳定并成熟为M0巨噬细胞。2.细胞培养条件:在含10%胎牛血清、10 mM Hepes、1 mM丙酮酸盐和50 µM β-巯基乙醇的RPMI 1640培养基中...
这两个标记物可以帮助我们确认细胞是否成功诱导成了M0巨噬细胞。 后续实验 🧪 诱导完M0之后,我会进行不同药物的干预实验。不过要注意,后续使用的培养基里不能含有PMA哦。至于M1和M2的实验,我暂时还没经验,但可以参考一些文献,比如《Optimization of differentiation and transcriptomic profile of THP-1 cells into ...
佛波酯诱导THP-1分化为M0型巨噬细胞的条件优化
下图演示了如何将单核细胞分化为 M0/M1/M2 巨噬细胞。 (A)图是细胞表型变化的相差显微镜图像。可见,用200ng/mL PMA刺激 72小时后,悬浮的 THP-1 单核细胞分化为 M0 巨噬细胞,粘附在细胞壁上,并有伸展的突起。接着,再用20ng/mL IFN-γ和 100ng/mL LPS(诱导向M1分化) 或20ng/mL IL-4(诱导向M2分化...
目的优化诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞所需的佛波酯(PMA)浓度和刺激时间.为研究生物活性材料对巨噬细胞表型和功能的调控作用奠定实验基础.方法分析不同PMA浓度与刺激时间下THP-1细胞的形态,贴壁程度,M0型巨噬细胞表面标志物以及巨噬细胞M1和M2表型相关基因的表达.结果在25~100 ng/mL PMA浓度范围和24~72 h刺...
目的:我们知道一种名为12-脂氧合酶(12-LOX)的双加氧酶在肿瘤发生中起着重要的作用,并且在多种肿瘤,例如前列腺,乳腺肿瘤和黑色素瘤等中,能够促进血管的生成和肿瘤细胞的增殖.我们的研究表明放疗可增强食管鳞癌细胞(ESCC)中12-LOX的表达.此外,我们了解到肿瘤微环境中存在着两种巨噬细胞.一种亚型是M1,它能够抑制...
THP-1 用185ng/ml佛波酯(PMA,用DMSO溶解)作用6小时,诱导细胞分化为巨噬细胞。然后,在PMA继续存在的情况下,通过分别: •与IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M1极化。•与IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M2表型极化。
1.PMA诱导:通常使用佛波酯(PMA)将THP-1单核细胞分化为巨噬细胞样细胞。常用方法是将THP-1细胞与150 nM的PMA孵育24小时。之后,将细胞在RPMI培养基中继续培养24小时,以使其稳定并成熟为M0巨噬细胞。2.细胞培养条件:在含10%胎牛血清、10 mM Hepes、1 mM丙酮酸盐和50 µM β-巯基乙醇的RPMI 1640培养基中...