1.PMA诱导:通常使用佛波酯(PMA)将THP-1单核细胞分化为巨噬细胞样细胞。常用方法是将THP-1细胞与150 nM的PMA孵育24小时。之后,将细胞在RPMI培养基中继续培养24小时,以使其稳定并成熟为M0巨噬细胞。2.细胞培养条件:在含10%胎牛血清、10 mM Hepes、1 mM丙酮酸盐和50 µM β-巯基乙醇的RPMI 1640培养基中...
THP-1巨噬细胞佛波酯目的优化诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞所需的佛波酯(PMA)浓度和刺激时间.为研究生物活性材料对巨噬细胞表型和功能的调控作用奠定实验基础.方法分析不同PMA浓度与刺激时间下THP-1细胞的形态,贴壁程度,M0型巨噬细胞表面标志物以及巨噬细胞M1和M2表型相关基因的表达.结果在25~100 ng/mL PMA...
THP-1 用185ng/ml佛波酯(PMA,用DMSO溶解)作用6小时,诱导细胞分化为巨噬细胞。然后,在PMA继续存在的情况下,通过分别: •与IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M1极化。•与IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M2表型极化。 极化完成后,细胞用不含刺激物...
可见,用200ng/mL PMA刺激 72小时后,悬浮的 THP-1 单核细胞分化为 M0 巨噬细胞,粘附在细胞壁上,并有伸展的突起。接着,再用20ng/mL IFN-γ和 100ng/mL LPS(诱导向M1分化) 或20ng/mL IL-4(诱导向M2分化) 处理 24小时后,巨噬细胞呈现较大的胞体和较长的突起,说明可能分别往M1或M2分化了。 (B)图...
一、THP-1细胞的极化 1) THP-1细胞铺板,将佛波酯PMA(100 ng/ml)加入完全培养基中,诱导其向巨噬细胞的成熟; 2) 48小时后THP-1细胞成熟为巨噬细胞,外观圆形高折光,从悬浮状态快速变成贴壁状态; 3) 将成熟的巨噬细胞消化下来(Accutase酶消化:专门用于消化贴壁细胞),重新铺板,诱导向M1-like、M2-like的极化。
THP-1+PMA 诱导24h qPCR测巨噬标志物表达 CD11b表达高至55倍 这两张图的结果我期盼太久了,有半年之余,其过程有多痛苦,现在就有多开心。虽然还有很长的路要走,但是细胞养好了,也就等于高楼的第一层建扎实了。 根据各个大佬的经验,结合自己的实际情况,讲讲我是怎么养好THP-1并诱导成巨噬的。
1.THP-1细胞的诱导分化 (1)THP-1用185ng/ml佛波酯(PMA,用DMSO溶解)作用6小时,诱导细胞分化为巨噬细胞(M0)。 (2)在PMA继续存在的情况下,通过分别: •与IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M1表型极化。 •与IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M2...
目的优化诱导THP-1细胞分化为M0型巨噬细胞所需的佛波酯(PMA)浓度和刺激时间.为研究生物活性材料对巨噬细胞表型和功能的调控作用奠定实验基础.方法分析不同PMA浓度与刺激时间下THP-1细胞的形态,贴壁程度,M0型巨噬细胞表面标志物以及巨噬细胞M1和M2表型相关基因的表达.结果在25~100 ng/mL PMA浓度范围和24~72 h刺...
THP-1;巨噬细胞;佛波酯;流式细胞术巨噬细胞(macrophage,Mφ)是一类由血液中单核细胞分化而来的固有免疫细胞,在机体免疫反应中发挥重要作用[1]。但是由于细胞数量少,分离过程较繁琐[2,3],因此多用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)诱导THP-1单核细胞系分化而成的THP-1-Mφ作为研究巨噬细胞功能...