之前也有考虑过,如果转染效率不高,抗性细胞比例少,在细胞增殖的过程中无抗性细胞可能越来越多,所以我采用了递增加压的方式,让无抗性细胞逐渐死亡,恢复抗性细胞比例。 (4)理论上说,每次慢病毒感染前,由于THP-1细胞状态改变,都需要重新滴定MOI和相应抗生素加压浓度。但实际上,我个人观点是,只要细胞状态够好,同一个...
方法采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP-1细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率。结果腺病毒对THP-1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大。MOI=200时,转染效率较低,仅为(29.81...
方法采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP-1细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率。结果腺病毒对THP-1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大。MOI=200时,转染效率较低,仅为(29.81...
方法采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP一1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP—l 细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率。结果腺病毒对THP一1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大。MOI=200时,转染效率较低,仅为(...
方法 采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP一1巨噬细胞 ,并用荧光显微镜观察细胞转 染荧光表达情况,流式细胞仪检测 THP.1细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率。结果 腺病毒对 THP一1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大。MOI =200时,转染效率较...
取对数增殖期NC和BECN1-shRNA组THP-1细胞,按照慢病毒操作手册优化确定的感染复数(MOI)=50,添加 Polybrene 条件进行感染。观察各组细胞中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)表达以评估感染效率,经1.5 μg/mL嘌昤霉素筛选并扩大培养后得到稳转株,收集细胞进行下游实验。
5.根据权利要求4所述的一种慢病毒转染技术构建cd226分子高表达的thp-1细胞系的方法,其特征在于:根据thp-1细胞moi值以及慢病毒滴度计算加入的相应病毒量,使用rpmi1640完全培养基补足至2ml,慢病毒量的计算公式:慢病毒体积=(moi×细胞数目)/慢病毒滴度。
21、③每隔2天,重复操作步骤②一次(即进行一次细胞换液),一共筛选2周;得到具备高破骨细胞分化能力的thp-1细胞,该细胞可稳定表达csf1r和rank受体; 22、所述的人rank慢病毒上清液的感染复数moi优选为50; 23、所述的人csf1r慢病毒上清液的感染复数moi优选为50; 24、所述的puromycin在培养基中的终浓度优选为2μ...
(c4)将上述lenticrisprv2(b)-grna-epb41-3,pcmv-vsv-g和pspax2质粒共转染到293t细胞包出慢病毒上清; (c5)将上述慢病毒上清,加入thp-1细胞,经嘌呤霉素筛选后,获得epb41基因敲除细胞系。 进一步地,所述的步骤(a3)、步骤(b3)和步骤(c3)中,所述质粒分别为lenticrisprv2(b)-grna-epb41-1,lenticrisprv2(...
MOI=60时,转染率最高,EGFP阳性率为(91.96±1.66)%,细胞病死率升至(7.25±0.50)%,此时病死率才有统计学意义(P0.05).脂质体2000对THP-1巨噬细胞毒性较大,细胞死亡率高,转染效率极低,不适合转染.结论腺病毒与慢病毒转染THP-1巨噬细胞各存在一定优劣,在实验中需酌情选择,脂质体2000不适宜转染THP-1巨噬细胞....