在研究过程中,需要对THP-1细胞进行电转染,以实现外源基因的转染和表达。下面将介绍一种常用的THP-1细胞电转方法。 1. 购买所需试剂和试验器材:首先需要购买所需的试剂和试验器材,包括电转剂、细胞培养基、完整培养基、含抗生素的培养基、细胞培养器具(离心管、移液器、离心机等)等。 2. 预处理THP-1细胞:将...
1.2 细胞传代:THP-1细胞密度应在8×10^5至1×10^6个细胞/ml之间,每2-3天传代一次。 二、电转试剂 2.1 质粒DNA:选择合适的质粒表达载体,含有目的基因的表达序列。 2.2 转染试剂:常用的转染试剂有聚乙烯亚胺(PEI)和脂质体转染试剂。 2.3 负载DNA:将质粒DNA与转染试剂混合,形成复合物。 三、电转过程 3.1 TH...
1. 转染效率方面。 脂质体转染法的转染效率相对来说是比较低的,就像在一群细胞里,只有一小部分细胞能收到我们的“快递”。电穿孔转染法在合适的条件下,转染效率能比脂质体转染法高不少,能让更多的细胞得到转染。病毒载体转染法呢,它的转染效率也比较可观,在一些情况下可能比电穿孔转染法还要好一点,能把东西送到...
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时THP-1细胞的电转染条件是: 对于0.2 cm电转杯,细胞密度为10x10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为140V, 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯,…
答案：进行THP-1细胞转染，即是将外源基因导入THP-1细胞的过程。这涉及到一系列步骤和技术操作，具体方法如下：一、转染流程简述 1. 准备细胞：确保THP-1细胞处于良好生长状态，并对其进行适当的分化诱导。2. 选择转染方法：根据目的基因大小和特性选择合适的转染方法，如电穿孔法、脂质体转染等。3. ...
使用Entranster-E电转液与菜为载指数衰减脉冲电转仪时THP-获够断1细胞的电转染条件是：对于0.2 cm...
Zeta Life 公司与美国加利福尼亚大学旧金山校区联合开发用于哺乳动物细胞、活体动物转染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子转染试剂,此技术成为新的全球蛋白功能、免疫细胞及干细胞治疗、研发及生产的主要关键技术之一。
使用Entranster-E电转液与Amaxa Nucleofector进行电穿孔时THP-1细胞的推荐程序设置(0.2 cm电转杯中100μl电穿液) 程序设置为V-001,DNA用量为2μg,细胞密度为10x10^6 cells/ml
对于24孔培养板的THP1细胞转染实验，关键步骤如下：首先，确保细胞状态适宜，转染前一天，将细胞接种在每孔500微升无抗生素的培养基中，让细胞密度达到30-40%。其次，为siRNA和RFectSP的混合物做准备：取6 pmol siRNA用50微升无血清培养基稀释，然后取2微升RFectSP用同样量的无血清培养基稀释。轻轻混合...
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是：脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染，其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些，但操作更繁琐、成本也更高。● 脂质体转染成本低廉，但细胞毒性较大，细胞死亡率较高；● 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平，但可能对细胞免疫状态影响大；● 慢病毒转染细胞...