TAIL-PCR引物设计 和一般的PCR反应相比，TAIL-PCR反应对引物的要求较高，引物的设计很是重要。特异性引物和简并引物的选择直接影响扩增的效果。特异引物设计3个嵌套的特异性引物长度一般在20~30bp之间，Tm值一般设为58~68℃。SP1、SP2和SP3之间最好相距100bp以上以便在电泳时更容易区分3轮PCR产物。简并引物设计简...
在基因研究中，Tail PCR（末端 PCR）是一种用于获取 DNA 序列末端区域的常用方法。它的原理基于设计特定的引物，包括特异性引物和退火温度较低的兼并引物。首先，根据已知的 DNA 序列，设计三条同向的特异性引物。这些引物的退火温度较高，以确保它们的特异性。同时，设计一条或几条退火温度较低的兼并...
Tail PCR的独特之处在于其特异性的巢式引物设计。这些引物长度较长，使得它们在PCR反应中的退火温度相对较高。这使得它们在高或低退火温度下，都能与已知目标序列进行特异性结合，而不受温度影响。相比之下，常规的短引物仅在较低的退火温度下能与未知序列（目标序列的侧翼序列）结合。通过交替使用高低温...
在进行Tail PCR实验时，首先需要遵循一定的原则来设计引物。通常情况下，建议使用24至26个碱基的特异性引物，以确保实验的精确性。引物的Tm（熔解温度）应保持在64至65%之间，而GC含量则应处于44至55%的区间内。如此一来，就可以实现同时进行多个不同Tail PCR的实验。值得注意的是，在实际操作中，设计...
TAIL-PCR TAIL-PCR技术技术 2010年10月18日年月日 TAIL-PCR技术的原理反应条件和引物设计特点应用 如何获得未知的侧翼序列 Unknownseqknownseq Unknownseq 获得侧翼序列的方法 PlasmidrescueInversePCR……TAIL-PCR 热不对称交错PCR技术热不对称交错 ThermalAsymmetricInterlaced(TAIL)PCR Unknownseq SP3 SP2 SP1Unknownseq...
整个实验过程分为三大块:引物设计、DNA提取和PCR、产物纯化回收测序。引物设计是电脑上干的活,质量最稳定也最容易控制。干生物的DNA提取是需要闭着眼睛就能搞定的事,切胶回收测序就更不在话下了。 五是应用广泛,适合高通量分析。Tail-PCR最多的用来对插入突变中插入位点的分析,从而寻找到与谋突变表型相关的基因,...
TAIL-PCR引物设计 和一般的PCR反应相比，TAIL-PCR反应对引物的要求较高，引物的设计很是重要。特异性引物和简并引物的选择直接影响扩增的效果。特异引物设计3个嵌套的特异性引物长度一般在20~30bp之间，Tm值一般设为58~68℃。SP1、SP2和SP3之间最好相距100bp以上以便在电泳时更容易区分3轮PCR产物。简并引物设计简...
在TAIL-PCR 反应中,后两种非目标产物可以通过以嵌套的特异性引物进行的后续反应来消除。TAIL-PCR 技术的基本原理是利用目标序列旁的已知序列设计3 个嵌套的特异性引物( special prime ,简称sp1 ,sp2 ,sp3 ,约20 bp) ,用它们分别和1个具有低Tm 值的短的(14 bp) 随机简并引物(Arbit rary degenerate prime ...
TAIL-PCR的基本原理是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(specialprimer,简称 sp1,sp2,sp3,约20bp),用它们分别和1个具有低Tm值的短的随机简并引物(Arbitrarydegenerate prime,AD,约14bp)相组合,以基因组DNA为模板.根据引物的长短和特异性的差异设计不对称的温度循环,通过分级反应来扩增特异引物(流程...