因为TA克隆简单成功率高,大多数的Taq酶都会在PCR产物的末端加一个碱基A,而T载体的缺口有一个凸出的T,正好可以配对,省去了对克隆载体和PCR产物的酶切,而且T载体连接的效率高,操作简单,可进行测序后对正确克隆扩大培养,切下目的片段,用于后续实验,这样得到的目的片段量大而且序列单一准确。登录后方可回帖 登录 忘记...
如果实在没有IPTG和X-gal，也最好能先挑几个单菌落去做菌落PCR，从中选取阳性的菌落去做液体摇菌，提质粒，找一个目标判断上有的酶做一个单切，同时用自连的空载作为对照，看是否能够切开。如果菌体克隆切开了，空载切不开，才能说明找到了阳性克隆。送去测序才比较可靠。否则直接送去测序，很可能...
poly结构可以尝试测序下去,应该没有太大问题,至于你说的引物问题,将已知的载体序列去掉开始那部分就应该是你的引物序列,因为是简并引物,所以只会出现一种引物情况,或者是你 PCR的时候,上下游的简并引物之间是不是特异性不好,所以出现不是你需要的扩增产物,你挑选的单克隆只是其中的一种,或者你挑选另外的单克隆试...
poly结构可以尝试测序下去，应该没有太大问题，至于你说的引物问题，将已知的载体序列去掉开始那部分就应该是你的引物序列，因为是简并引物，所以只会出现一种引物情况，或者是你 PCR的时候，上下游的简并引物之间是不是特异性不好，所以出现不是你需要的扩增产物，你挑选的单克隆只是其中的一种，或者...
RT，为什么会是大肠杆菌的序列（比对上100%）？难道是载体和大肠杆菌的序列连接上了，所以菌落在氨苄培养...
我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？因为...
我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？因为...
我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？因为...
我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？因为...