因为要扩增的是被插入基因片段,所以应提取突变体植株的DNA.将DNA片段连接起来的酶是DNA连接酶.图示中表示出了DNA合成方向是:引物A是顺时针方向,那么,B、D就是逆时针方向,C也是顺时针方向.利用A、D这对引物扩增的将是T-DNA片段,而利用B、C这对引物扩增的才是被插入的基因片段....
T-DNA可能随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植物形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T-
(6)T-DNA存在于诱导形成的拟南芥突变体植株的DNA中.DNA连接酶可将不同的DNA片段进行连接.因为DNA两条链反向平行,由图示环状DNA外侧链DNA合成方向可判断,DNA扩增过程所选的引物应为B、C,这样可确保被插入的基因片段得到复制.要注意DNA两条单链反向平行,B、C作为引物可保证插入的基因片段优先复制. ...
今天分享的是三引物法鉴定T-DNA插入突变体。 关于Ti质粒和T-DNA: Ti质粒是土壤农杆菌的天然质粒,该质粒上有一段特殊的DNA区段,当农杆菌侵染植物细胞时,该DNA区段能自发转移,插入植物染色体DNA中,Ti质粒上的这一段能转移的DNA被叫做T-DNA。人们根据这一现象,将Ti质粒进行改造,将感兴趣的基因放进T-DNA区段中...
利用基因工程技术,将T-DNA片段插入到A基因中导致A基因突变,可获得突变体。为获知T-DNA插入位置,可用PCR技术进行扩增,应从如图选择的引物组合是( )535—3353IV5一A基因片段→一T-DNA片段→4一A基因片段一→注:I、Ⅱ、III、IV为引物 A.引物Ⅰ与引物Ⅱ B.引物Ⅰ与引物Ⅲ C.引物Ⅱ与引物Ⅳ D.引物Ⅲ与引物...
1 科研人员将T-DNA片段(T-DNA的区段带有潮霉素抗性基因)插入正常株(野生型)水稻愈伤组织单个染色体DNA中,导致被插入基因(PIN蛋白基因)发生突变,得到矮杆水稻(突变型)Q.科研人员利用矮杆突变体Q进行自交得到F1: (1)统计F1代植株的株高,并剪取其叶片在含 ___ 选择培养基进行筛选,统计实验结果如表. 潮霉素抗性...
T-DNA可随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。 用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌 (其中
拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 09生工吴超 200900140129 一、实验原理 T-DNA插入法是反向遗传学研究的重要手段。T-DNA是农杆菌的一个大质粒，长度在25kb左右。野生型农杆菌的T-DNA上带有激素合成基因，感染植物后会导致植物细胞快速增殖形成愈伤组织，失去分化能力。所以一般实验使用改造后...
PCR法鉴定T-DNA插入突变体1概论 PCR法鉴定T-DNA插入突变体 T-DNA插入 •T-DNA，转移DNA（transferredDNA)是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA序列，可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组 •将目的基因转入到经过改造的T-DNA区，借农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，获得转基因植株 •除用于转...