PCR方法为鉴定纯合突变体提供了有利手段。它利用三个引物LP、RP和BP,其中LP和RP是植物基因组上T-DNA插入位点两测的引物,BP是T-DNA区段上的引物。 经过PCR,在野生型植株,LP和RP这对引物扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带);在杂合突变体,LP和RP能扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带),另外BP和RP...
鉴定拟南芥T-DNA插入的突变体有专门的网站可以使用，它们分别是突变体突变信息查询网站，以及鉴定突变体的引物设计网站，具体的网站信息如下所示：突变信息查询网站：http://signal.salk.edu/cgi-bin/tdnaexpress/引物设计网站：http://signal.salk.edu/tdnaprimers.2.html 利用突变信息查询网站查询拟南芥T-DNA插入信...
T-DNA可能随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变.用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T-D
PCR方法为鉴定纯合突变体提供了有利手段。它利用三个引物LP、RP和BP,其中LP和RP是植物基因组上T-DNA插入位点两测的引物,BP是T-DNA区段上的引物。 经过PCR,在野生型植株,LP和RP这对引物扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带);在杂合突变体,LP和RP能扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带),另外BP和RP...
T-DNA可随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子(称为Tl 代)。(1)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾,需要去除 ,因为后者...
tdna突变原理通过T-DNA插入宿主细胞染色体中,如果插入的位置在某个基因内,那么这个基因就可能失去它的作用,这样的个体就是T-DNA插入突变体。 基因突变的三种类型分别是: 1.碱基置换,包括同义突变、错义突变、无义突变和延长突变(终止密码突变)。 2.碱基插入与缺失,包括移码突变和整码突变。 3.动态突变,某些单基...
三引物法鉴定T-DNA插入突变体 Ti质粒是土壤农杆菌的天然质粒，Ti质粒上的特殊DNA区段，当农杆菌侵染植物细胞时，能自发转移并插入植物染色体DNA中，这一DNA区段被称为T-DNA。人们通过将Ti质粒进行改造，将感兴趣的基因放进T-DNA区段中，通过农杆菌侵染植物细胞，实现外源基因对植物的遗传转化。利用PCR...
(6)T-DNA存在于诱导形成的拟南芥突变体植株的DNA中.DNA连接酶可将不同的DNA片段进行连接.因为DNA两条链反向平行,由图示环状DNA外侧链DNA合成方向可判断,DNA扩增过程所选的引物应为B、C,这样可确保被插入的基因片段得到复制.要注意DNA两条单链反向平行,B、C作为引物可保证插入的基因片段优先复制. ...
突变体鉴定的步骤 1.T-DNA插入基因的基因组序列;2.T-DNA插入方向的确定;3.T-DNA插入位置的确定;4.引物设计;5.PCR扩增;6.电泳检测,T-DNA插入基因的基因组序列 点击基因编号进入网页 点击sequenceviewer进入 点击nucleotideview进入 点击突变体编号后进入的网页 进入网站查找基因突变体及插入方向 实验设计 T-DNA...
PCR法鉴定T-DNA插入突变体1概论 PCR法鉴定T-DNA插入突变体 T-DNA插入 •T-DNA，转移DNA（transferredDNA)是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA序列，可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组 •将目的基因转入到经过改造的T-DNA区，借农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，获得转基因植株 •除用于转...