tdna突变原理通过T-DNA插入宿主细胞染色体中,如果插入的位置在某个基因内,那么这个基因就可能失去它的作用,这样的个体就是T-DNA插入突变体。 基因突变的三种类型分别是: 1.碱基置换,包括同义突变、错义突变、无义突变和延长突变(终止密码突变)。 2.碱基插入与缺失,包括移码突变和整码突变。 3.动态突变,某些单基...
原理: T-DNA是农杆菌Ti质粒中的一段DNA序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物核基因组中。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区,借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合,获得转基因植物。除用于转基因以外,T-DNA插入到植物的基因中,基因由于发生碱基的插入或缺失而发生突变。
人们根据这一现象,将Ti质粒进行改造,将感兴趣的基因放进T-DNA区段中,通过农杆菌侵染植物细胞,实现外源基因对植物的遗传转化。 操作步骤 PCR方法为鉴定纯合突变体提供了有利手段。它利用三个引物LP、RP和BP,其中LP和RP是植物基因组上T-DNA插入位点两测的引物,BP是T-DNA区段上的引物。 经过PCR,在野生型植株,LP...
t-DNA的插入通常是随机发生的,因此需要通过重复筛选最终获得所需的突变体。t-DNA插入失活技术的操作步骤一般包括以下几个方面: 1.农杆菌培养 首先,选择具有植物感染能力的农杆菌或其样品进行培养。农杆菌通常在LB寒天板或惠氏寒天板中进行培养,同时在高速搅拌培养基中将其培养至3000–4000rpm的浓度。 2.t-DNA构建...
T-DNA插入突变体鉴定方法主要有两种：三引物法和双引物法。在本实验中使用三引物法。三引物法的原理如图1所示，即采用三引物（LP、RP、BP）进行PCR扩增。野生型植株目的基因的两条染色体上均未发生T-DNA插入，所以其PCR产物仅有1种，分子量约900bp（即从LP到RP）；纯合突变体植株目的基因的两条染色体上均发生T...
十三模式植物拟南芥T-DNA插入突变体的PCR鉴定 一、实验目的：▪1.学习用PCR方法检测生物遗传差异；▪2.了解植物T-DNA插入突变体的鉴定原理。二、实验原理 1.Ti质粒和T-DNA▪Ti质粒是土壤农杆菌的天然质粒，该质粒上有一段特殊的 DNA区段，当农杆菌侵染植物细胞时，该DNA区段能自发转移，插入植物染色体DNA中...
T-DNA是能插入宿主细胞染色体的一段DNA，通过T-DNA插入，把一段T-DNA插入正常的染色体中（比如让植物感染农杆菌，插入的位置通常是随机的），如果插入的位置在某个基因内，那么这个基因可能就失去了它的作用．这样的个体就是T-DNA插入突变体．
本实验即检测所得植株是否为T-DNA的插入突变体。 1.引言 Ti质粒是土壤农杆菌的天然质粒,该质粒上有一段特殊的DNA区段,当农杆菌侵染植物细胞时,该DNA区段能自发转移进植物细胞,并插入植物染色体DNA中。Ti质粒上的这一段能转移的DNA被叫做T-DNA。若将Ti质粒进行改造,把感兴趣的基因放进T-DNA序列中,通过农杆菌...
三引物法鉴定T-DNA插入突变体:三引物法的原理下图所示,即采用三引物(LP、RP、BP)进行PCR扩增。野生型植株目的基因的两条染色体上均未发生T-DNA插入,所以其PCR产物仅有1种,分子量约1100 bp (即从LP到RP);纯合突变体植株目的基因的两条染色体上均发生T-DNA插入,T-DNA本身的长度约为25 kb,过长的模板会阻止...