拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 09生工吴超 200900140129 一、实验原理 T-DNA插入法是反向遗传学研究的重要手段。T-DNA是农杆菌的一个大质粒，长度在25kb左右。野生型农杆菌的T-DNA上带有激素合成基因，感染植物后会导致植物细胞快速增殖形成愈伤组织，失去分化能力。所以一般实验使用改造后的农杆菌——T-DNA中导入了卡...
如果 T-DNA插入某个功能基因的内部,特别是插入到外显子区, 将造成基因功能的丧失。所以利用农杆菌Ti质粒转化植物 细胞,是获得植物突变体的一种重要方法。 2021/10/10 3 3. 用PCR方法鉴定T-DNA插入纯合突变体 ▪ 农杆菌Ti质粒转化植物细胞后,在获得的后代分离群体中, 有T-DNA插入的纯合突变体,杂合突变体,...
T-DNA可随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子(称为T1代)。(2)为筛选出已转化的个体,需将T1代播种在含___的培养基上...
T-DNA插入鉴定的原理 突变体鉴定的步骤 1.T-DNA插入基因的基因组序列；2.T-DNA插入方向确实定；3.T-DNA插入位置确实定；4.引物设计；5.PCR扩增；6.电泳检测。T-DNA插入基因的基因组序列 点击基因编号进入网页 点击sequenceviewer进入 点击nucleotideview进入 点击突变体编号后进入的网页 进入网站查找基因突变体及...
突变体是遗传学研究的最重要材料。 突变体可以通过自然突变和人工诱变的方法获得。 拟南芥诱变常用方法有EMS诱变、T-DNA插入突变、激活标签。 由于T-DNA插入突变体便于对突变基因进行追踪,目前拟南芥、水稻中已经有大量的T-DNA插入突变体;SALK中心提供的拟南芥T-DNA插入突变体超过十万种。 3、T-DNA插入突变原理 T-DN...
由于T-DNA插入突变体便于对突变基因进行追踪,目前拟南芥、水稻中已经有大量的T-DNA插入突变体;SALK中心提供的拟南芥T-DNA插入突变体超过十万种。 3、T-DNA插入突变原理 T-DNA,转移DNA(transferred DNA),是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组。人们将目的基因插入到经过改造...
插入突变（insertionalmutagenesis），即将外源DNA随机插 入到拟南芥基因组中而获得其突变体。植物中最常见的插入突变方法是T-DNA插入突变。农杆菌转化法：Ti质粒是土壤农杆菌的天然质粒，质粒上有一段特殊的DNA区段，当农杆菌侵染植物细胞时，该DNA区段能自发转移，插入植物染色体DNA中，Ti质粒上的这一段能转移的DNA...
拟南芥T—DNA插入突变体的鉴定 1 1、反向遗传学 经典遗传学：由表及里，即通过杂交等手段观察表型性状的变化而推知遗传基因的存在与变化。表型—基因 反向遗传学：由里及表，即通过DNA重组等技术有目的地、精确定位地改造改造基因的精细结构以确定这些变化对表型性状的直接影响。基因—表型 2 1、反向遗传学 研究...
假设所处理植株为T−DNA单拷贝插入,则T1代植株自交后所结种子中具有抗除草剂性状的占 。继续种植具有抗除草剂性状的种子,长成植株后进行自交,若 ,表明获得了纯合的转基因突变体植株Y。 野生型拟南芥的抗盐性状与D基因密切相关,T−DNA插入到D基因中,致使该基因失活,失活后的基因记为d。收集上述突变体Y叶片...
在突变体研究中,需要的材料是纯合突变体。本次实验意在对模式植物拟南芥T-DNA插入突变体进行鉴定。实验中用到的主要实验方法有:CTAB法提取拟南芥基因组DNA、PCR扩增目的基因片段、琼脂糖凝胶电泳分离核酸。 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。每完成一个循环需2...