PCR方法为鉴定纯合突变体提供了有利手段。它利用三个引物LP、RP和BP,其中LP和RP是植物基因组上T-DNA插入位点两测的引物,BP是T-DNA区段上的引物。 经过PCR,在野生型植株,LP和RP这对引物扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带);在杂合突变体,LP和RP能扩增出分子量较大的产物(野生型基因,大带),另外BP和RP...
T-DNA可能随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植物形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养,收获种子(称为T1代)。 T-DNA被插入的基因片段 环状DNA示意图 A、B、C、D表示能...
拟南芥T-DNA插入突变体库。 T-DNA已用于在拟南芥、水稻、玉米和短枝曲霉中产生较大的插入突变(敲除)文库。在这些文库中对T-DNA侧翼序列进行测序发现,在连接的T-DNA部分中,RB通常比LB更精确完整。RB连接序列的相对精度归因于与RB共价连接的VirD2蛋白可以保护它免受核酸外切酶消化。而较大的LB侧翼缺失被归因于LB末端...
(a)nor-like基因的结构及四个靶点的示意图;(b)nor-like基因的两个突变株系#1、#11的编辑情况,这两个突变株系均为双等位纯合突变,#1有1个碱基的插入,#11有11个碱基的删除,红色序列表示靶位点,绿色序列表示被编辑的情况,蓝色序列表示PAM序列。 图17 对油菜BnSFAR4基因的靶点设计及突变株系的靶点检测结果 (Ka...
拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 09生工吴超 200900140129 一、实验原理 T-DNA插入法是反向遗传学研究的重要手段。T-DNA是农杆菌的一个大质粒，长度在25kb左右。野生型农杆菌的T-DNA上带有激素合成基因，感染植物后会导致植物细胞快速增殖形成愈伤组织，失去分化能力。所以一般实验使用改造后的农杆菌——T-DNA中导入了卡...
图一是F1代杂合的结果，第一个样品是WT对照 图二是既有杂合也有突变纯合的电泳结果 然后你发现图一第...
1、拟南芥拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定插入突变体的鉴定 实验目的实验目的1熟练掌握植物基因组DNA快速提取的方法;2掌握利用PCR方法鉴定拟南芥T-DNA插入突变体的方法。 T-DNA插入鉴定的原理突变体鉴定的步骤1. T-DNA插入基因的基因组序列;2. T-DNA插入方向的确定;3. T-DNA插入位置的确定;4. 引物设计;5. PCR扩...
1、 拟南芥t-dna插入突变体的鉴定摘要:我们用ctab法提取拟南芥的t-dna插入突变体的dna,然后用三引物法进行pcr和琼脂糖凝胶电泳来判断其为突变纯合体还是突变杂合体。通过这次实验,我们掌握了如何来判断纯和突变和杂合突变。关键字:拟南芥 t-dna插入突变 突变体的鉴定前言: 拟南芥 拟南芥是十字花科的植物,它是植物...
反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上通过对靶基因进行必要的加工和修饰如定点突变基因插入缺失基因置换等再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组让其装配出具有生命活性的个体研究生物体基因组的结构与功能以及这些修饰可能对生物体的表型性状有何种影响等方面的内容 拟南芥T-DNA基因插入突变鉴定 ...
为获得突变体,科研人员通常将T-DNA插入野生型个体的某些基因中(如下图)。使用PCR技术确定T-DNA的插入位置,应选择的引物组合是( ) A. 引物1和引物3 B.