拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定 09生工吴超 200900140129 一、实验原理 T-DNA插入法是反向遗传学研究的重要手段。T-DNA是农杆菌的一个大质粒，长度在25kb左右。野生型农杆菌的T-DNA上带有激素合成基因，感染植物后会导致植物细胞快速增殖形成愈伤组织，失去分化能力。所以一般实验使用改造后的农杆菌——T-DNA中导入了卡...
T-DNA是能插入宿主细胞染色体的一段DNA，通过T-DNA插入，把一段T-DNA插入正常的染色体中（比如让植物感染农杆菌，插入的位置通常是随机的），如果插入的位置在某个基因内，那么这个基因可能就失去了它的作用．这样的个体就是T-DNA插入突变体．
科研人员将T-DNA片段(T-DNA的区段带有潮霉素抗性基因)插入正常株(野生型)水稻愈伤组织单个染色体DNA中,导致被插入基因(PIN蛋白基因)发生突变,得到矮杆水稻(突变型)Q.科研人员利用矮杆突变体Q进行自交得到F1:(1)统计F1代植株的株高,并剪取其叶片在含___选择培养基进行筛选,统计实验结果如表.潮霉素抗性F1植株性状...
首先，在T-DNA上有一种或多种抗性基因,比如说卡那霉素,同过筛选得到T-DNA插入的突变体,然后通过多次自交确定并得到纯合体
检测过表达株系,可以检测两类基因:(1)真核抗性基因,常见的是潮霉素磷酸转移酶基因(HptII)、草丁膦乙酰转移酶基因(Bar)、新霉素磷酸转移酶基因(NPTII)等,这些基因序列固定,每个实验室估计都有固定的、“传承”下来的引物序列;(2)目的基因,在T-DNA上设计一条引物,在目的基因上设计另一条引物,用这两条引物来进...
首先，在T-DNA上有一种或多种抗性基因,比如说卡那霉素,同过筛选得到T-DNA插入的突变体,然后通过多次...
1、PCR法鉴定T-DNA插入突变体T-DNA插入 T-DNA,转移DNA(transferred DNA)是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组 将目的基因转入到经过改造的T-DNA区,借农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合,获得转基因植株 除用于转基因以外,T-DNA插入到植物基因中能引起基因的...
T0代结的种子，也就是T1代的苗子会有分离的情况(AA、Aa、aa)，这一代主要是筛选AA的纯系，具体的做法是结合你转基因质粒上的抗性，田间筛选，收获T1有抗性株系的所有种子（长大为T2代植株），把这些种子种下去即T2代植株，T2代苗期抗生素筛选，选取抗性没有分离、全部抗的株系的种子，即存系的AA...
T-DNA 可能随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下:种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的
IPCR确定T-DNA突变体插入位点 - 副本激活标签突变体的筛选 (1)将激活标签农杆菌转化后收获的种子播种在营养培养土中。 (2)待苗出齐后(8-10天左右),喷施体积比1:1000水稀释的除草剂(商品 名为Finale.,有效成份为5.78 % Glufosinate-ammonium ),每7天喷施2次,连续 21天,筛选对除草剂有抗性的转化植株(...