( 1) 尽量使用一次性手套 专用整套移液器 成套试剂和其他必需品, 避免外来 DNA 污染反应体系( 2) DNA 模板应稀释为适宜的浓度, 使加入 PCR 反应的 DNA 样品体积最好在 4 ～ 5 l 如果 DNA 模板 样品量太少, 仅有 1 ～ 2 l, 不仅实验操作难度大, 而且如果操作时间长, 会导致 DNA 反应液部分 或全部...
(3) 可以先将 DNA 样品加到 PCR 管底部,再加其他 PCR 反应混合液加样时选择不同的方位加DNA 模板和其他 PCR 反应混合液,这样枪头靠壁加样时不会交叉污染。 (4) 加样完毕后,盖上盖子,混匀反应液,再低速离心片刻( 1 min 左右) 如果不是立即进行 PCR 扩增,需将 PCR 反应混合液置于 - 20 ℃保存备用。
SSR分子标记是一种基于PCR技术的DNA分子标记技术,具有多态性高、共显性遗传、数量丰富、分布广泛、易于检测等优点,因此在植物遗传育种、动物遗传育种、遗传图谱构建、基因定位、物种亲缘关系鉴定等领域有广泛的应用前景。通过PCR扩增和电泳分离,可以检测和分...
3.bp值标记:根据Marker标准分子质量的条带大小(碱基对数,bp),确定扩增出的条带的大小,然后以bp值表示基因型数据: 在理想情况下,SSR分子标记的扩增结果只有特异性较高的目标产物,然而在真实的实验过程中,可能由于引物特异性较低或PCR反应参数的问题,导致出现一些模糊或非特异性条带,导致影响对目标产物的判读,如下...
尽管微卫星DNA分布于整个基因组的不同位置,但其两端序列多是保守单拷贝序列,因此可以根据这两端的序列设计以对特异引物,通过PCR技术将其间的核心微卫星DNA序列扩增出来,利用电泳分析技术就可以获得其长度多态性。SSR标记的高度多态性主要来源与串联数目的不同。根据分离片段的大小决定基因型,并计算等位基因发生频率。 2...
4.取PCR产物15ul加3ul上样缓冲液(6x)于1.6%或1.8%琼脂糖胶上电泳,稳压50-100V(电压低带型整齐,分辨率高)。 5.电泳结束,溴化乙锭染色20分钟。 6.用凝胶成像仪观察、拍照。 操作流程简图: 3 Paula Marquardt & Craig Echt Published in: Echt CS, May-Marquardt P, Hseih M, Zahorchak R. 1996. Chara...
引物设计是指设计用于PCR扩增目标DNA片段的引物序列。在SSR分析中,引物设计是非常重要的一步,因为引物的选择会直接影响到PCR扩增的效率和准确性。引物设计通常需要考虑到目标序列的特点,如重复序列的长度、GC含量、Tm值等,以确保引物能够特异性地扩增目标序列。
种子SSR检测的基本步骤包括DNA提取、SSR引物筛选、PCR扩增、电泳分析和数据解读和分析。其中,DNA提取是种子SSR检测的第一步,通常使用化学方法(如CTAB法)来破碎种子细胞并释放DNA。接下来,选择具有多态性的SSR引物用于PCR扩增,以产生目标位点的DNA片段。利用选...
4.取PCR产物15ul加3ul上样缓冲液(6x)于%或%琼脂糖胶上电泳,稳压50-100 V(电压低带型整齐,分辨率高)。5.电泳结束,溴化乙锭染色 20分钟。6.用凝胶成像仪观察、拍照。操作流程简图:3. SSR GEL and Silver Stai ning P rotocolP aula Marquardt & Craig EchtP ublishedin: Echt CS, May-Marquardt P, ...
的基因组节段进行PCR扩增。 一、实验材料 不同来源的DNA(30-50ng/ul)。 二、实验设备 PCR仪,PCR管或硅化的0.5mleppendorf管,电泳装置,凝胶成像仪。 三、试剂 1、ISSR引物:购买成品或根据加拿大BritishColumbia大学设计的ISSR引物序列(见 附录)自己合成 ...