引物和探针浓度: 引物/ Probe mix 贮存液(20×) 工作液(1×) 每反应用量 6-FAM Probe 4Hmol/L 0Onmol/L 5pmol/ Rxn VIC Probe 4umol/L 200nmol/L. Forward Primer 18umol/L. 900nmol/L 22. 5pmol/ Rxn Reverse Primer 18umol/L 注:Rxn即表示平行实验中每“一个反应”的符号。 (2)PCR反应体系...
KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)又称为竞争性等位基因特异性PCR,是基于引物末端碱基的特异性匹配对SNP进行检测的方法。 该方法在引物和探针设计上与常规荧光PCR不同,首先需针对SNP的等位基因设计两条对应的上游引物,引物3’末端分别位于各自的SNP位点上,同时引物5...
为保证待测目的区域测序真实可靠,引物设计应该使待测目的区域边界距离上下游引物至少各50 bp; 引物设计建议使用在线方式,以保证成功率; 为保证测序敏感性,PCR产物片段大小应在250 bp-650 bp范围; 为方便实验,建议引物合成时分装成1 o.d/管,方便将PCR与测序的引物分开; ...
在扩增过程中,只有当引物3’末端的碱基与SNP位点的等位基因互补配对时,才能正常延伸扩增;而当引物3’末端的碱基与SNP位点的等位基因不互补配对时,则不发生扩增反应,由此对扩增产物进行凝胶电泳或荧光PCR检测,则可确定SNP基因型。 ●在ARMS-PCR基础上也发展出了一些改良方法,如四引物扩增阻滞突变系统 PCR(tetra-...
KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)是基于引物末端碱基的特异性匹配对SNP进行检测的方法,该方法在引物和探针设计上与常规荧光PCR不同,首先需针对SNP的等位基因设计两条对应的上游引物,引物3’末端分别位于各自的SNP位点上,同时引物5’端各自带有一段独特的标签序列,而下游引物...
二、PCR-RFLP法：PCR-RFLP是SNP分型最经典的研究方法，其最大优势在于，不需要有特殊的仪器，检测操作简单，费用低廉，也适合中量样本的检测；缺点是需要大量人力，耗时相对较长，不适合高通量大样本检测。不仅能够对有酶切位点的SNP进行分型，对于不存在合适酶切位点的SNP位点，可通过在PCR引物3’端改变个别碱基...
ARMS PCR将SNP位点设计在上游引物3’末端,结合Taqman探针的方法检测荧光信号值,从而判断野生型和突变型等位基因。换言之,我们应用ARMS PCR对野生型和突变型等位基因进行检测时,需要设计两条3’端核苷酸分别对野生型和突变型特异的上游引物,以及一条通用的下游引物,一条通用的探针。在Taq DNA聚合酶作用下,与模板不能...
引物和探针浓度: 引物/ Probe mix 贮存液(20×) 工作液(1×) 每反应用量 6-FAM Probe 4Hmol/L 0Onmol/L 5pmol/ Rxn VIC Probe 4umol/L 200nmol/L. Forward Primer 18umol/L. 900nmol/L 22. 5pmol/ Rxn Reverse Primer 18umol/L 注:Rxn即表示平行实验中每“一个反应”的符号。 (2)PCR反应体系...
1.TaqMan探针法 针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针，进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时，该探针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏两荧光分子间...