KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)又称为竞争性等位基因特异性PCR,是基于引物末端碱基的特异性匹配对SNP进行检测的方法。 该方法在引物和探针设计上与常规荧光PCR不同,首先需针对SNP的等位基因设计两条对应的上游引物,引物3’末端分别位于各自的SNP位点上,同时引物5...
二、原理SNP-PCR的原理因使用的方法不同而有所差异,一般说来用SNP检测技术分型根据其原理可大致分为四类,引物延伸法,特异探针杂交法,核苷酸连接法,损伤切除法;针对结果分析方法的不同可以分为荧光法,化学发光法,分子量测定法,酶联反应法等。从图136~图139中可以了解其原理。 1.引物延伸法(1)质谱检测法[图136...
荧光定量PCR(Real-time PCR),是指在PCR扩增反应体系中加入荧光基团,通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 一、荧光定量PCR原理 以探针法荧光定量PCR为例:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一...
为保证引物的特异性,建议引物设计后在NCBI上blast确认; 为防止降解,PCR产物应尽快测序,否则应该保存在-20℃,且时间不宜过长; 为保证结果真实性,建议对关键点进行反向测序确认。 http://weixin.qq.com/r/0nVmfkjEHhVhrQwd9yDA (二维码自动识别)
KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)是基于引物末端碱基的特异性匹配对SNP进行检测的方法,该方法在引物和探针设计上与常规荧光PCR不同,首先需针对SNP的等位基因设计两条对应的上游引物,引物3’末端分别位于各自的SNP位点上,同时引物5’端各自带有一段独特的标签序列,而下游引物则是一条常规设计共用的引物;其次,设计...
KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR)是基于引物末端碱基的特异性匹配对SNP进行检测的方法,该方法在引物和探针设计上与常规荧光PCR不同,首先需针对SNP的等位基因设计两条对应的上游引物,引物3’末端分别位于各自的SNP位点上,同时引物5’端各自带有一段独特的标签序列,而下游引物则...
不仅能够对有酶切位点的SNP进行分型，对于不存在合适酶切位点的SNP位点，可通过在PCR引物3’端改变个别碱基引入限制性内切酶酶切位点，使该位点变成常见酶切位点，能对所有SNP位点用RFLP来分析。三、Taqman探针法：该技术是由ABI研发的SNP分型技术，其技术原理如下：PCR反应时，加入一对两端有不同荧光标记的MGB...
采用的巢式PCR-RFLP分型技术,其基本原来是利用PCR引物的3’端,对SNP位点附近的碱基进行人为改造,产生一个常规的限制性内切酶识别序列,如SNP rs1321425(rs1321425-来自NCBI的refSNP数据库)的C/G,其任何一个碱基和上下游碱基无法形成一个可直接被限制性内切酶识别的序列,于是我们对SNP位点前的上游碱基进行改造,通过对...
二、原理SNP-PCR的原理因使用的方法不同而有所差异,一般说来用SNP检测技术分型根据其原理可大致分为四类,引物延伸法,特异探针杂交法,核苷酸连接法,损伤切除法;针对结果分析方法的不同可以分为荧光法,化学发光法,分子量测定法,酶联反应法等。从图136~图139中可以了解其原理。 1.引物延伸法(1)质谱检测法[图136...
二、原理SNP-PCR的原理因使用的方法不同而有所差异,一般说来用SNP检测技术分型根据其原理可大致分为四类,引物延伸法,特异探针杂交法,核苷酸连接法,损伤切除法;针对结果分析方法的不同可以分为荧光法,化学发光法,分子量测定法,酶联反应法等。从图136~图139中可以了解其原理。 1.引物延伸法(1)质谱检测法[图136...