由于 SEC-HPLC及 CE-SDS相对简单易行,成为分析抗体类药物大小异质性的两种常规方法。中检院的研究人员利用非还原CE-SDS及常规(无处理)和变性(SDS和碘乙酰胺处理) SEC-HPLC评价了一种抗VEGF单抗的大小异质性,初步阐明了二者结果差异的原因,为抗体制品的质量控制研究提供了理论基础。 三种分析的结果比较如下图所示,可...
SEC-HPLC进行蛋白纯度分析时出现蛋白粘柱子是因为蛋白与柱填料发生了可逆或不可逆的相互作用,导致峰展宽、拖尾甚至不出峰等现象,影响蛋白的准确定量。为了解决这一问题,可以在流动相中添加减少相互作用的添加剂,例如提高盐浓度、添加精氨酸和有机溶剂等。
抗体纯度测定主要面临两方面挑战：有效分离抗体分子与杂质及对主蛋白与杂质的高灵敏检测。紫外、荧光、电化学及质谱等检测器常用于此，为确保结果的准确性，通常采用两种分离方法。SEC-HPLC（凝胶排阻高效液相色谱）和CE-SDS（凝胶电泳-十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）是两种常用的分析手段，它们在抗体大小...
利用毛细管电泳法(ce-sds)或sds-page电泳法的抗体药物纯度分析方法简单、成本很低,且在确定样品中蛋白质组分方面灵敏度很高,因而成为蛋白纯度分析常用的技术之一。sds-page可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离。 分子筛hplc,又称为体积排阻色谱(size exclusionchromatogr...
近年来,rHuPH20与胰岛素一“·、免疫球蛋白一,和抗体弘。91等多种生物药制成的复方注射剂已进入临床试验阶段。重组蛋白制品的纯度检测主要有非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳(sDs—PAGE)和高效液相色谱法(HPLC)法2类”叫。其中,高效分子排阻色谱法(size—exclusion highpedbrmance liquid chromatograph,SEC—HPLc)具有操作...
继USP<621>修订版生效之后,美国药典又于2023年5月在PF49 (3) 中提议对通则<129>治疗性重组单克隆抗体药物的分析方法 (Analytical Procedures for Recombinant Therapeutic Monoclonal Antibodies1)) 进行修订:针对用于蛋白质SEC分析的L59型色谱柱,增加超高速、高性能的UHPLC色谱柱,即补充了单克隆抗体的SEC-UHPLC分析...
将质谱检测器连接到SEC分析系统对抗体分子大小变异体、糖链结构进行分析的应用越来越多。但同LS分析一样,MS分析也会因柱流失的影响导致分析困难。 使用TSKgel UP-SW3000-LS,在最初的色谱柱平衡过程中就能去除几乎所有脱落的干扰物质,在之后进样空白样品 (洗脱液) 时,柱流失也非常少,与市售其他品牌的UHPLC-SEC色...
近年来,rHuPH20与胰岛素 [4-6] 、免疫球蛋白 [7] 和抗体 [8-9] 等多种生物药制成的复方注射剂已进入临床试验阶段。重组蛋白制品的纯度检测主要有非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和高效液相色谱法(HPLC)法2类 [10] 。其中,高效分子排阻色谱法(size-exclusion high performance liquid chromatograph,SEC-...
SEC-HPLCSEC-HPLC2010版中国药典版中国药典对仪器的一般要求和色谱条件对仪器的一般要求和色谱条件色谱柱:多使用凝胶或亲水刚性、多孔微球、机械强度好的聚合物等填充物使用水或缓冲盐作为流动相,流动相的pH值一般控制在28之间。流速一般在0.51.0ml/min检测器:常用UV(紫外-可见)检测器,检测波长通常为280nm。Page :...
纳米抗体是一类日益增长的用于治疗目的的单域抗体片 段.与其他 SEC 色谱柱相比,Agilent AdvanceBio SEC 120 Å 1.9 µm 色谱柱在纳米 抗体聚集体和片段的高分离度分离方面具有独特的优势.Agilent AdvanceBio HIC 色谱柱能够分析纳米抗体的翻译后修饰 (PTMs),例如谷氨酰胺/焦谷氨酸转化....