详述SDS-PAGE 银染法(PHARMACIA) 1979 年 Switzer 和 Merril 等首先在 “Analytical Biochemistry” 上介绍了比考马斯亮蓝染色灵敏 2 个数量级的银染色方法,它可以检测小至 0.38 ng/mm2的牛血清白蛋白。这个方法接着在 1980 年由 Oakley 等进一步发展以达到简化程序和...
6. 重复步骤5两次; 7. 弃去清洗用水,加5倍体积的硝酸银溶液,室温下平缓摇动30 min; 8. 弃去硝酸银溶液,用纯水(去离子水)漂洗凝胶两面,每面20 s; 9. 加5倍体积的新鲜显影液,室温下平缓摇动,数分钟内出现蛋白质的染色条带,继续至条带清晰; 10. 用1%乙酸清洗凝胶终止反应,再用纯水(去离子水)水漂洗数次...
SDS-PAGE考马斯亮蓝-银染色将凝胶泡在至少5倍体积的固定液中室温下412h去掉固定液将胶泡在至少5倍体积的30乙醇中室温30minshaking并重复1次1h弃去乙醇加入10倍体积的去离子水室温10min重复1次20min弃去水加入5倍体积硝酸银溶液室温30min弃去硝酸银溶液去离子水漂洗凝胶2面各20s不可让胶脱水倍体积显影液数分钟内...
考马斯亮蓝染色脱色液 【组分浓度】10%(v/v)醋酸,25%(v/v)乙醇 名称 用量 备注 冰醋酸 100ml 乙醇 250ml 去离子水 650ml 充分混匀后使用 2、实验步骤 2.1. 制胶 2.1.1 组装胶架 将洁净、无水的玻片对齐,形成空腔,插入塑料框的凹槽中,注意箭头向上,并 确保下端平齐。放于制胶架上夹紧,下端紧贴密封...
b. 银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间,水洗涤的时间不能超过1.5分钟,否则会导致过多的银离子被洗去,导致检测灵敏度下降。 c. 上样量不足。本试剂盒检测BSA的灵敏度可以达到0.3ng,对于不同的蛋白检测灵敏度可能不同。对于一些蛋白可能需要大于1ng的蛋白量才能被检测到。
银染染色后的蛋白质条带清晰,但染色后的蛋白质不能再进行其他分析,因为银离子会与蛋白质结合,影响后续分析。 3. 荧光染料 荧光染料可以在紫外光下发出荧光,从而实现对蛋白质的标记和检测。荧光染料灵敏度高,可以检测到低浓度的蛋白质,且染色后的蛋白质可以进行其他分析。但是,荧光染料的成本较高,...
注:含甲醛的溶液要现配现用,因甲醛在空气中容易挥发而使浓度不足,使用时可按比例扩大,AgNO3溶液可重复使用,甲醛为还原剂,还原银离子为单质银。SDS-PAGE操作流程一一碘染1、5%(W/V)BaCl2染胶板15min或更长时间。2、水洗三次,每次1min3、2.0gKI+1.3gI2+50mLH2O混匀,染胶15min。(先让KI溶于水,待完全溶解...
↓ 水洗２*１０min ↓ 银染20min，避光染的[共100ml，甲醛40ul，AgNO3终浓度0.25%，两者现用现混合...
样品的浓度需要根据样品的组成、分析目的和检测方法的来进行选择。例如,用考马斯亮蓝染色,可用浓度为1~2 mg/mL的样品。银染色所用的样品浓度则可比考马斯亮蓝染色低20~100倍。再例如,样品组分复杂,像细胞匀浆液,为了观察痕量成分,主带便会过量。对于高纯度的样品,选择0.5~2mg/mL蛋白最为合适。
蛋白质分析中一银染法与考马斯亮蓝染色法敏感性的比较高裕刘秀梵张如宽江苏农学院动物医学系,扬州一技术,是蛋白质分析最常用的手段之一。一分离后的条带,通常采用考马斯亮蓝进行染色。年代产生了一种更为敏感的染色方法—银染法,为了比较该法与常规考马斯亮蓝染色法的敏感性,特进行本试验。试验步骤蛋白样品以电子...